Экспрессия эпителиального маркера цитокератина CK19 у мышей с аденокарциномой молочной железы под действием фитоантиэстрогена секоизоларицирезинола

Введение. Эффективность фитоантиэстрогена секоизоларицирезинола (СЕКО) из группы лигнанов аналогична эффективности селективного модулятора экстрогенных рецепторов тамоксифену (ТАМ) на эстрогенпозитивных моделях рака молочной железы (РМЖ) мышей и человека in vivo. Тамоксифен в силу антагонистических и агонистических свойств одновременно с эффективной профилактикой метастазирования РМЖ увеличивает риск развития аденокарциномы матки. Влияние СЕКО на пролиферативную активность циркулирующих опухолевых клеток, а также их способность к прогрессии (образование скрытых метастазов) не изучена.

Цель исследования – оценка риска диссеминации опухолевых клеток у мышей с перевиваемой аденокарциномой молочной железы под действием СЕКО в сравнении с ТАМ.

Материалы и методы. Исследование проводили на мышах линии BDF1 [C57Bl6j × DBA2] c подкожно привитой карциномой молочной железы Са755. Для выявления диссеминированных опухолевых клеток использовали эпителиальный маркер – внутриклеточный цитокератин CK19. Оценку содержания CK19-положительных клеток в циркуляции и костном мозге животных проводили методом проточной цитометрии и иммунофлуоресцентной микроскопии через 24 ч после 10-дневного введения СЕКО (в эффективной разовой дозе 250 мг/кг) или ТАМ (в разовой дозе 50 мг/кг).

Результаты. В группах мышей, получавших СЕКО и ТАМ, величины среднего геометрического интенсивности флуоресценции (GMFI) для экспрессии CK19 в крови составили 28,87 ± 13,70 и 28,02 ± 9,50 соответственно; в контрольной группе роста опухоли (КРО) без лечения – 31,94 ± 5,02. Показатель GMFI экспрессии СK19 в костном мозге в группах СЕКО, ТАМ и КРО составил 30,14 ± 2,33; 39,07 ± 2,30 и 32,48 ± 3,75 соответственно.

Заключение. В результате установлено, что у мышей с аденокарциномой молочной железы Са755, чувствительной к СЕКО или ТАМ, показатели экспрессии СK19 в клетках периферической крови имеют близкие значения и недостоверно отличаются от такового в контрольной группе животных. В костном мозге мышей-опухоленосителей показатель GMFI экспрессии СK19 в группе СЕКО был достоверно ниже по сравнению с этим показателем в группе ТАМ (р = 0,0003). Данные, полученные на мышиной модели, свидетельствуют в пользу низкого риска потенцирования диссеминации клеток аденокарциномы молочной железы при применении фитоантиэстрогена СЕКО по терапевтической схеме.

1. Milder I.E., Arts I.C., van de Putte B. Lignan contents of Dutch plant foods: a database including lariciresinol, pinoresinol, secoisolariciresinol and matairesinol. Br. J Nutr 2005;93(3):393–402. DOI: 10.1079/BJN20051371.

2. Нифантьев Н.Э., Яшунский Д.В., Меньшов В.М. Патент РФ 2359666, 2009. Способ выделения секоизола рицирезинола и дигидрокверцетина из древесины.

3. Седакова Л. А, Смирнова Г.Б., Борисова Ю.А., Трещалина Е.М. Результаты скрининга нового фитоантиэстрогена секоизоларицирезинола на гормонозависимой опухолевой модели in vivo. Российский биотерапевтический журнал 2013;12(2):73.

4. Седакова Л.А., Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б., Трещалина Е.М. Сравнительная эффективность секоизоларицирезинола и тамоксифена, в том числе в комбинации с аримидексом. Российский биотерапевтический журнал 2013;12(2):73.

5. Седакова Л.А., Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б., Трещалина Е.М. Действие нового антиэстрогенного препарата секоизоларицирезинола на рост запущенной эстрогензависимой опухоли и метастазирование меланомы В16/F10. Российский биоте рапевтический журнал 2013;12(3):74.

6. Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б., Райхлин Н.Т., Трещалина Е.М. Результаты скрининга фитоантиэстрогена секоизоларицирезинола на эстрогензависимой аденокарциноме молочной железы Са755. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2014;25(1‒2):26–30.

7. Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б., Ан дронова Н.В. и др. Результаты доклинического изучения секоизоларицирезинола на опухолевых моделях in vivo. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина 2014;25(3–4):43–6.

8. Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б., Андронова Н.В. и др. Результаты доклинического изучения секоизоларицирезинола на подкожных ксенографтах рака молочной железы человека. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина 2015;26(1):47–51.

9. Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б., Шубина И.Ж. и др. Фитоэстрогены – потенциальные селективные модификаторы биологически активных реакций при раке молочной железы. Российский онкологический журнал 2016;21(4):212–9.

10. Neis K.J., Brandner P., Schlenker M. Tamoxifen-induced hyperplasia of the endometrium. Contrib Gynecol Obstet 2000;20:60–8. PMID: 11791286.

11. Дмитриева Е.В., Пустотина О.А., Костин И.Н. Cостояние эндометрия у женщин, получающих адъювантную терапию тамоксифеном после хирургического лечения рака молочной железы. Вестник РУДН 2013;5:219–24.

12. Xenidis N., Mavroudis D., Kalmanti L. et al. Effect of adjuvant Tamoxifen and Letrozol on the fate of peripheral blood CK-19 mRNA+ cells in patients with early breast cancer. Ann Oncol 2007;18:1623–31. DOI: 10.1093/annonc/mdm208.

13. Saloustros E., Perraki M., Apostolaki S. et al. Cytokeratin-19 mRNA-positive circulating tumor cells during follow-up of patients with operable breast cancer: prognostic relevance for late relapse. Breast Cancer Research 2011;13(R60): 2–11. DOI. ORG/10.1186/BCR2897.

14. Braun S., Pantel K., Muller P. et al. Cytokeratin-positive cells in the bone marrow and survival of patients with stage I, II, or III breast cancer. N Engl J Med 2000;342:525–33. DOI: 10.1056/NEJM200002243420801. PMID: 10684910.

15. Stathopoulou A., Onikolis I., Mavroudis D. et al. Molecular detection of cytokeratin-19-positive cells in the peripheral blood of patients with operable breast cancer: evaluation of their prognostic significance. J Clin Oncol 2002;20:3404–12. DOI: 10.1200/JCO.2002.08.135. PMID: 12177100.

16. Wang L., Wang Y., Liu Y. et al. Flow cytometric analysis of CK19 expression in the peripheral blood of breast carcinoma patients: relevance for circulating tumor cell detection. J Exp Clin Cancer Res 2009;28(1):57. DOI: 10.1186/1756-9966-28-57.

17. Шубина И.Ж., Борисова Ю.А., Смирнова Г.Б. и др. Диссеминация клеток аденокарциономы молочной железы Са755 в костный мозг мышей на фоне селективных модификаторов эстрогеновых рецепторов (СМЭР). Российский биотерапевтический журнал 2015;13(1):146–7.

18. Sparano J., O’Neill A., Alpaugh K. et al. Circulating tumor cells five years after diagnosis are prognostic for late recurrence in operable stage II–III breast cancer. 2018; San Antonio Breast Cancer Symposium. Abstract GS6–03.

19. Кит О.И., Новикова И.А., Селютина О.Н. и др. Исследование уровня ЦОК при эпителиальных опухолях различных локализаций. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований 2015;12(5):817–20.

20. Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др. Методические рекомендации по доклиническому изучению противоопухолевой активности лекарственных средств. В кн. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. М.: Гриф и К, 2012. C. 642–657.

21. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей. ЕЭС. Страсбург, 1985. Анималогия 1993;1:29.

22. Большаков О.П., Незнанов Н.Г., Бабаханян Р.В. Дидактические и этические аспекты проведения исследований на биомоделях и на лабораторных животных. Качественная клиническая практика 2002;1:54–9.