КРИОКОНСЕРВАЦИЯ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Введение. Применение клеточных технологий в медицине предполагает возможность длительного хранения клеточного продукта без утраты его жизнеспособности и основных свойств. Методики криоконсервации клеток, применяемые в клинике, довольно разнообразны и могут сильно отличаться друг от друга. Тем не менее в самом методе можно выделить 2 части: 1‑я – замораживающая среда, в которой находятся клетки, 2‑я – способ криоконсервации. В данной работе мы исследуем метод, который используют в Национальном медицинском исследовательском центре онкологии им. Н. Н. Блохина для криоконсервации костного мозга у онкологических больных (взрослых и детей) для последующей трансплантации. Замораживающая среда состоит из полиглюкина (95 %) и диметилсульфоксида (5 %), а криоконсервация происходит в парах жидкого
азота (–160 °С).
Цель исследования – показать, что предлагаемый способ криоконсервации дендритных клеток высокоэффективен, прост, воспроизводим и наиболее удобен для клинического применения.
Материалы и методы. Зрелые дендритные клетки, которые культивировали из моноцитов периферической крови, подвергали криоконсервации, после чего исследовали, как меняются жизнеспособность, экспрессия основных поверхностных антигенов и стимулирующая активность в отношении аллогенных Т-лимфоцитов.
Результаты. Криоконсервация приводила к гибели незначительной части клеток, а повторная заморозка увеличивала долю мертвых клеток. Между тем разница в экспрессии основных поверхностных антигенов у свежих, криоконсервированных и повторно криоконсервированных дендритных клеток была статистически недостоверна. Уровень стимулирующей активности свежих и криоконсервированных дендритных клеток был одинаковым, тогда как повторная криоконсервация приводила к достоверному снижению пролиферации аллогенных Т-лимфоцитов.
Заключение. Представленный метод криоконсервации позволяет эффективно сохранять жизнеспособность и основные функции дендритных клеток. Для введения вакцины больному после разморозки дендритных клеток достаточно развести их изотоническим раствором, что наиболее удобно для клинического применения.

1. John J., Hutchinson J., Dalgleish A., Pandha H. Cryopreservation of immature monocyte-derived dendritic cells results in enhanced cell maturation but reduced endocytic activity and efficiency of adenoviral transduction. J Immunol Methods 2003;272:35. DOI: 10.1016/s0022-1759(02)00430-1.

2. Thumann P., Moc I., Humrich J. et al. Antigen loading of dendritic cells with whole tumor cell preparations. J Immunol Methods 2003;277(1–2):1–16. DOI: 10.1016/S0022-1759(03)00102-9.

3. Zobywalski A., Javorovic M., Frankenberger B. et al. Generation of clinical grade dendritic cells with capacity to produce biologically active IL-12p70. J Transl Med 2007;5:18. DOI: 10.1186/1479-5876-5-18.

4. Sundarasetty B., Kloess S., Obers-chmidt O. et al. Generation of lentivirusinduced dendritic cells under GMPcompliant conditions for adaptive immune reconstitution against cytomegalovirus after stem cell transplantation. J Trans Med 2015;13:240. DOI: 10.1186/s12967-015-0599-5.

5. Nava S., Lisini D., Pogliani S. et al. Safe and reproducible preparation of functional dendritic cells for immunotherapy in glioblastoma patients. Stem Cells Transl Med 2015;4:1164–72. DOI: 10.5966/sctm.2015-0091.

6. Ponsaerts P., van Tendeloo V., Cools N. et al. mRNA-electroporated mature dendritic cells retain transgene expression, phenotypical properties and stimulatory capacity after cryopreservation. Leukemia 2002;16:1324–30. DOI: 10.1038/sj.leu.2402511.

7. Zhou Q., Zhang Y., Zhao M. et al. Mature dendritic cell derived from cryopreserved immature dendritic cell shows impaired homing ability and reduced anti-viral therapeutic effects. Sci Rep 2016;6:39071. DOI: 10.1038/srep39071.

8. Петенко Н.Н., Михайлова И.Н., Чкадуа Г.З. и др. Вакцинотерапия меланомы кожи дендритными клетками после хирургического лечения. Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи 2015;1:43–9.

9. Чкадуа Г.З., Заботина Т.Н., Буркова А.А. и др. Адаптирование методики культивирования дендритных клеток человека из моноцитов периферической крови для клинического применения. Российский биотерапевтический журнал 2002;3:56.

10. Долгополов И.С., Чкадуа Г.З., Менткевич Г.Л. Роль и место иммунотерапии в детской онкологии: некоторые клинические примеры. Иммунология гемопоэза 2015;13(1):63.

11. Самойленко И.В., Заботина Т.Н., Михайлова И.Н. и др. Дендритноклеточная вакцина в комбинации с химиотерапией в лечении диссеминированной меланомы кожи: окончательные результаты одноцентрового рандомизированного контролируемого исследования II фазы. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 2016;27(2):119.