ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИНИМАЛЬНОГО КОЛИЧЕСТВА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И МОНИТОРИНГА ЛЕЧЕНИЯ НЕЙРОБЛАСТОМЫ У ДЕТЕЙ

Диагностика, лечение и выработка тактики проводимой терапии нейробластомы (НБ) у детей являются нерешенными проблемами современной детской онкогематологии. Один из ключевых аспектов мониторинга терапии НБ – обнаружение и контроль минимальной остаточной болезни. В обзоре рассмотрены современные методы, используемые для обнаружения минимальной остаточной болезни при НБ, такие как иммуноцитохимия, флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), проточная цитометрия, методы качественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) (обратно-транскриптазная ПЦР, RT-PCR) и количественной ПЦР (QRT-PCR) для оценки мРНК. Специфический маркер НБ, дизиалоганглиозид GD2, определяют методом проточной цитометрии или иммуноцитохимии, повышая ее специфичность с помощью флуорохромов. В настоящее время метод FISH является «золотым стандартом» для оценки статуса гена MYCN при НБ. Широко используемый метод многопараметровой проточной цитометрии позволяет достичь высокой специфичности анализа при диагностике НБ. Для выявления клеток НБ с  помощью RT-PCR предлагаются разные мишени, но в  настоящее время единственной признанной мишенью является мРНК тирозингидроксилазы. При  этом показано, что QRT-PCR имеет преимущество перед более традиционной качественной RT-PCR, поскольку этот метод позволяет более точно и количественно определить 1 или несколько мРНК в клинических образцах. Обсуждаются результаты исследований по сравнению чувствительности методов диагностики, таких как RT-PCR, проточная цитометрия, FISH и др. Сравнительные исследования включали многопараметровую проточную цитометрию с  различными комбинациями моноклональных антител CD9/CD81/CD56/CD45/GD2, традиционную RT-PCR и количественную – QRT-PCR для  обнаружения циркулирующих клеток НБ в  образцах от  пациентов с онкологией и здоровых добровольцев. Несмотря на то что каждый из оцениваемых методов имеет свои преимущества, авторы акцентируют внимание на том, что именно многопараметровая проточная цитометрия позволяет быстро и надежно определять минимальную остаточную болезнь или микрометастазы НБ. 

1. Maris J.M., Hogarty M.D., Bagatell R., Cohn S.L. Neuroblastoma. Lancet 2007;369(9579):2106–20. DOI: 10.1016/S0140-6736(07)60983-0.

2. Matthay K.K., Maris J.M., Schleiermacher G. et al. Neuroblastoma. Nat Rev Dis Primers 2016;2:16078. DOI: 10.1038/nrdp.2016.78.

3. Monclair T., Brodeur G.M., Ambros P.F. et al. INRG Task Force. The International Neuroblastoma Risk Group (INRG) staging system: an INRG Task Force report. J Clin Oncol 2009;27(2):298–303. DOI: 10.1200/JCO.2008.16.6876.

4. Swerts K., Ambros P.F., Brouzes C. et al. Standardization of the Immunocytochemical Detection of Neuroblastoma Cells in Bone Marrow. J Histochem Cytochem 2005;53(12):1433–40. DOI: 10.1369/jhc.5C6661.2005.

5. Beiske K., Burchill S.A., Cheung I.Y. et al. Consensus criteria for sensitive detection of minimal neuroblastoma cells in bone marrow, blood and stem cell preparations by immunocytology and QRT-PCR: recommendations by the International Neuroblastoma Risk Group Task Force. Br J Cancer 2009;100(10):1627–37. DOI: 10.1038/sj.bjc.6605029.

6. Park J.R., Bagatell R., Cohn S.L. et al. Revisions to the International Neuroblastoma Response Criteria: A Consensus Statement From the National Cancer Institute Clinical Trials Planning Meeting. J Clin Oncol 2017;35(22):2580–7. DOI: 10.1200/JCO.2016.72.0177.

7. Wu Z., Schwartz E., Seeger R.C., Ladisch S. Expression of GD2 ganglioside by untreated primary human neuroblastomas. Cancer Res 1986;46(1):440–3.

8. Cheung N.K., Van Hoff D.D., Strandjord S.E., Coccia P.F. Detection of neuroblastoma cells in bone marrow using GD2 specific monoclonal antibodies. J Clin Oncol 1986;4:363–9.

9. Popov A., Druy A., Shorikov E. et al. Prognostic value of initial bone marrow disease detection by multiparameter flow cytometry in children with neuroblastoma. J Cancer Res Clin Oncol 2019;145(2):535–42. DOI: 10.1007/s00432-018-02831-w.

10. Warzynski M.J., Graham D.M., Axtell R.A. et al. Flow cytometric immunophenotyping test for staging/ monitoring neuroblastoma patients. Cytometry 2002;50(6):298–304. DOI: 10.1002/cyto.10159.

11. Swerts K., De Moerloose B.D., Dhooge C. et al. Detection of residual neuroblastoma cells in bone marrow: comparison of flow cytometry with immunocytochemistry. Cytometry B Clin Cytom 2004;61(1):9–19. DOI: 10.1002/cyto.b.20019.

12. Строганова А.М., Карселадзе А.И. Нейробластома: морфологическая структура, молекулярно-генетические особенности и прогностические факторы. Успехи молекулярной онкологии 2016;3(1):32–43. DOI: 10.17650/2313-805X.2016.3.1.32-43.

13. Somasundaram D.B., Aravindan S., Yu Z. et al. Droplet digital PCR as an alternative to FISH for MYCN amplification detection in human neuroblastoma FFPE samples. BMC Cancer 2019;19(1):106. DOI: 10.1186/s12885-019-5306-0.

14. Mandelia A., Agarwala S., Sharma A. et al. Assessment of fine needle aspiration cytology samples for molecular genetic analysis in neuroblastoma. Pediatr Surg Int 2013;29(11):1131–8. DOI: 10.1007/s00383-013-3370-0.

15. Villamуn E., Piqueras M., Mackintosh C. et al. Comparison of different techniques for the detection of genetic risk-identifying chromosomal gains and losses in neuroblastoma. Virchows Arch 2008;453(1):47–55. DOI: 10.1007/s00428-008-0633-6.

16. Coustan-Smith E., Sancho J., Behm F.G. et al. Prognostic importance of measuring early clearance of leukemic cells by flow cytometry in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood 2002;100(1):52–8. DOI: 10.1182/blood-2002-01-0006.

17. Гривцова Л.Ю., Лунин В.В., Семенова А.А. и др. Минимальная остаточная болезнь при плазмоклеточной (множественной) миеломе: проточно-цитометрические подходы. Онкогематология 2020;15(1):40–50. DOI: 10.17650/1818-8346-2020-15-1-40-50.

18. Кузнецов С.А., Шубина И.Ж., Мамедова Л.Т. и др. Методы идентификации микрометастазов при злокачественных новообразованиях. Онкогематология 2016;11(1):75–9. DOI: 10.17650/1818-8346-2016-11-1-75-79.

19. Rawstron A.C., Child J.A., de Tute R.M. et al. Minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry in multiple myeloma: impact on outcome in the Medical Research Council Myeloma IX Study. J Clin Oncol 2013;31(20):2540–7. DOI: 10.1200/JCO.2012.46.2119.

20. Гривцова Л.Ю., Тупицын Н.Н. Иммунологическая оценка гемодилюции костного мозга при лабораторных исследованиях (на основании теста М. Локен). Медицинский алфавит 2015;4(18):67–70.

21. Rawstron A.C., Böttcher S., Letestu R. et al. Improving efficiency and sensitivity: European Research Initiative in CLL (ERIC) update on the international harmonised approach for flow cytometric residual disease monitoring in CLL. Leukemia 2013;27(1):142–9. DOI: 10.1038/leu.2012.216.

22. Taback B., Hoon D.S.B. Circulating nucleic acids and proteomics of plasma/ serum: clinical utility. Ann N Y Acad Sci 2004;1022:1–8. DOI: 10.1196/annals.1318.002.

23. Zeerleder S. The struggle to detect circulating DNA. Crit Care 2006;10(3):142. DOI: 10.1186/cc4932.

24. O’Driscoll L. Extracellular nucleic acids and their potential as diagnostic, prognostic and predictive biomarkers. Anticancer Res 2007;27(3A):1257–65. PMID: 17593617.

25. Ootsuka S., Asami S., Sasaki T. et al. Useful markers for detecting minimal residual disease in cases of neuroblastoma. Biol Pharm Bull 2008;31(6):1071–4. DOI: 10.1248/bpb.31.1071.

26. Träger C., Vernby A., Kullman A. et al. mRNAs of tyrosine hydroxylase and dopa decarboxylase but not of GD2 synthase are specific for neuroblastoma minimal disease and predicts outcome for children with high-risk disease when measured at diagnosis. Int J Cancer 2008;123(12):2849–55. DOI: 10.1002/ijc.23846.

27. Nagai J., Ishida Y., Koga N. et al. A new sensitive and specific combination of CD81/CD56/CD45 monoclonal antibodies for detecting circulating neuroblastoma cells in peripheral blood using flow cytometry. J Pediatr Hematol Oncol 2000;22(1):20–6. DOI: 10.1097/00043426-200001000-00004.

28. Esser R., Glienke W., Bochennek K. et al. Detection of neuroblastoma cells during clinical follow up: advanced flow cytometry and rt-PCR for tyrosine hydroxylase using both conventional and real-time PCR. Klin Padiatr 2011;223(6):326–31. DOI: 10.1055/s-0031-1287842.

29. Tsang K.S., Li C.K., Tsoi W.C. et al. Detection of micrometastasis of neuroblastoma to bone marrow and tumor dissemination to hematopoietic autografts using flow cytometry and reverse transcriptase-polymerase chain reaction. Cancer 2003;97(11):2887–97. DOI: 10.1002/cncr.11389.