Особенности роста меланомы B16 у мышей C57BL/6 при использовании различных методов получения опухолевого материала и мест трансплантации сингенной опухоли

Введение. В неклинических исследованиях противоопухолевых средств использование различных источников получения опухолевого материала и мест трансплантации существенно влияет на параметры роста сингенных опухолей, на их инвазивный потенциал и профиль метастазирования.

Цель исследования – оценить кинетику роста сингенной меланомы B16 у мышей C57BL/6 при ортотопической (внутрикожной) и интрамаммарной (в жировую клетчатку молочной железы) трансплантации опухолевого материала, полученного разными методами.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на половозрелых мышах-самках линии C57BL/6. Сформировано 6 групп по 8 животных в каждой. Группам 1–3 трансплантировали опухолевый материал меланомы В16 в виде изографтов (50 % суспензия клеток из фрагмента опухоли), группам 4–6 – опухолевые клетки из первичной культуры, культивированные in vitro до раннего (P6) и позднего (P14) пассажей. Перевивку осуществляли внутрикожно или интрамаммарно.

Результаты. Установлено, что метод получения опухолевого материала (изографт или клеточная линия), число пассажей in vitro и сайт трансплантации (внутрикожно или интрамаммарно) значимо влияют на фенотипические особенности меланомы B16 после перевивки животным. В результате клональной селекции in vitro и in vivo наблюдали существенные различия во времени появления измеряемых опухолей, кинетике роста и профиле метастазирования. Интрамаммарная трансплантация опухолей обеспечивала снижение частоты возникновения язв (некрозов опухоли) по сравнению с внутрикожной перевивкой вне зависимости от источника опухолевого материала. В то же время развитие изъязвления опухолей значимо не влияло на продолжительность жизни животных.

Заключение. Результаты проведенного исследования дополняют имеющиеся сведения о том, что клетки сингенной меланомы B16 обладают как наследственными, так и селекционными фенотипическими признаками, которые влияют на их способность к метастазированию. Полученные данные могут быть использованы в рутинной работе центров доклинических исследований при планировании и проведении экспериментальных работ с использованием сингенных моделей опухолей.

1. Switzer B., Puzanov I., Skitzki J.J. et al. Managing metastatic melanoma in 2022: A clinical review. JCO Oncol Pract 2022;18(5):335–51. DOI: 10.1200/OP.21.00686

2. Taylor M.A., Hughes A.M., Walton J. et al. Longitudinal immune characterization of syngeneic tumor models to enable model selection for immune oncology drug discovery. J Immunother Cancer 2019;7(1):328. DOI: 10.1186/s40425-019-0794-7

3. European Parliament and the Council of the European Union. 2010. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union 2010;53:33–79.

4. Overwijk W.W., Restifo N.P. B16 as a mouse model for human melanoma. Curr Protoc Immunol 2001;Chapter 20:Unit 20.1. DOI: 10.1002/0471142735.im2001s39

5. Obodozie C., Ruf S., Bijelic G. et al. Abstract A012: Mammary fat pad injections: An alternative implantation method for syngeneic tumor models. Mol Cancer Therap 2019;18(12 Suppl.):A012. DOI: 10.1158/1535-7163.TARG-19-A012

6. Belhocine T.Z., Scott A.M., Even-Sapir E. et al. Role of nuclear medicine in the management of cutaneous malignant melanoma. J Nucl Med 2006;47(6):957–67. PMID: 16741305

7. Chen J.T., Dahmash N.S., Ravin C.E. et al. Metastatic melanoma in the thorax: Report of 130 patients. AJR Am J Roentgenol 1981;137(2):293–8. DOI: 10.2214/ajr.137.2.293

8. Jantscheff P., Beshay J., Lemarchand T. et al. Mouse-derived isograft (MDI) in vivo tumor models I. spontaneous sMDI models: Characterization and cancer therapeutic approaches. Cancers (Basel) 2019;11(2):244. DOI: 10.3390/cancers11020244

9. McCauley H.A., Guasch G. Serial orthotopic transplantation of epithelial tumors in single-cell suspension. Methods Mol Biol 2013;1035:231–45. DOI: 10.1007/978-1-62703-508-8_20

10. Poste G., Doll J., Fidler I.J. Interactions among clonal subpopulations affect stability of the metastatic phenotype in polyclonal populations of B16 melanoma cells. Proc Natl Acad Sci USA 1981;78(10):6226–30. DOI: 10.1073/pnas.78.10.6226

11. Kamensek U., Ursic K., Markelc B. et al. Mutational burden, MHC-I expression and immune infiltration as limiting factors for in situ vaccination by TNFα and IL-12 gene electrotransfer. Bioelectrochemistry 2021;140:107831. DOI: 10.1016/j.bioelechem.2021.107831