Иммунофенотипическое изучение дифференцировки эритрокариоцитов костного мозга у больных диффузной в-крупноклеточной лимфомой

Введение. Ранее работами лаборатории иммунологии гемопоэза были установлены типичные изменения гемопоэза у больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ). Среди них особое внимание было обращено на нарастание пропорции ок сифильных нормобластов, поскольку этот признак имел прогностическое значение.

Цель исследования – установление возможности идентификации более зрелой пропорции эритрокариоцитов проточно-ци тометрическим методом.

Материалы и методы. Исследование проведено у 60 больных ДВКЛ. Увеличение пропорции оксифильных эритробластов отмечено в 50 случаях (83,3 %). Проточно-цитометрические исследования костного мозга проведены у 30 больных ДВКЛ. Использовали моноклональные антитела к гликофорину А, CD45, CD36, CD117, CD71, CD105, CD34, HLA-DR, а также ядерные красители SYTO 16, SYTO 41.

Результаты. Использование гликофорина А в сочетании с одним из ядерных красителей и CD45 является эффективным для идентификации пула эритрокариоцитов. Основную фракцию составляют зрелые CD71+ гликофорин А+ клетки, которые не имеют характеристик клеток-предшественников. Во фракции CD45-негативных клеточных элементов присутствуют клетки CD71-гликофорин А–, которые представлены предшественниками – CD34+ CD117+ HLA-DR+/–. На эритрокари оцитах со слабой экспрессией гликофорина А и выраженной экспрессией CD71 (коммитированных по эритроидной дифферен цировке) в незначительном количестве присутствуют только антигены CD117 и HLA-DR, а CD34 полностью отсутствует. Наиболее информативным для характеристики более зрелой популяции эритрокариоцитов оказался подход, основанный на идентификации пула эритрокариоцитов по экспрессии CD36 с низкими характеристиками SSC (в этом случае гликофорин А, CD45 и ядерные красители можно не использовать, так как CD36 не взаимодействует с эритроцитами). После достижения пика экспрессии уровни CD36, CD71, CD105 снижаются. Именно эта фракция представляет собой наиболее зрелые эритрокариоциты. Корреляция процентного содержания этих клеток с выявляемыми морфологически оксифильными нормобластами близка к достоверной.

Заключение. Установлено, что наиболее зрелую фракцию эритрокариоцитов целесообразно проточно-цитометрически устанавливать на основании следующих характеристик: SSClow CD71low CD105low CD36+/low.

1. Владимирская Е.Б. Основы кроветворения. В кн.: Гериатрическая гематология. Под ред. Л.Д. Гриншпун, А.В. Пивник. М.: Медиум, 2011. С. 21–44. [Vladimirskaya E.B. Fundamentals of hematopoiesis. In the book: Geriatric hematology. Еd. by L.D. Grinshpun, A.V. Pivnik. M.: Medium, 2011. Pp. 21–44. (In Russ.)].

2. Тупицын Н.Н., Зейналова П.А., Френкель М.А., Османов Е.А. Роль костного мозга в прогнозе диффузной В-крупноклеточной лимфомы. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2015;1:72–7. [Tupitsyn N.N., Zeynalova P.A., Frenkel M.A., Osmanov E.A. The role of the bone marrow in the prognosis of diffuse B-large cell lymphoma. Voprosy biologicheskoj, medicinskoj i farmacevticheskoj himii = Questions of biological, medical and pharmaceutical chemistry 2015;1:72–7. (In Russ.)].

3. Фалалеева Н.А., Моженкова А.В., Османов Е.А. и др. Особенности эритропоэза больных фолликулярной лимфомой. Вестник ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» 2016;3:34–7. [Falaleeva N.A., Mozhenkova A.V., Osmanov E.A. et al. Peculiarities of erythropoiesis in patients with follicular lymphoma. Vestnik FGBU “RONC im. N.N. Blokhin” = Journal of N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center 2016;3:34–7. (In Russ.)].

4. Зейналова П.А., Шолохова Е.Н., Френкель М.А. и др. Взаимосвязь иммунофенотипа диффузной В-крупноклеточной лимфомы с особенностями кроветворения у больных. Технологии живых систем 2015;1:63–8. [Zeynalova P.A., Sholokhova E.N., Frenkel M.A. et al. Interrelation of immunophenotype of diffuse B-large cell lymphoma with features of hematopoiesis in patients. Tekhnologii zhivyh sistem = Technologies of living systems 2015;1:63–8. (In Russ.)].

5. Тимонина Е.Г., Френкель М.А., Колбацкая О.П., Подвязников С.О. Характеристика гемопоэза у больных плоскоклеточным раком головы и шеи. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 2009;20 (3):75–81. [Timonina E.G., Frenkel M.A., Kolbatskaya O.P., Podviaznikov S.O. Characterization of hemopoiesis in patients with squamous cell carcinoma of the head and neck. Vestnik RONC im. N.N. Blokhin RAMN = Journal of N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center 2009;20(3):75–81. (In Russ.)].

6. Френкель М.А. Исследование костного мозга в онкологии. Иммунология гемопоэза 2014;12(1–2):18–41. [Frenkel M.A. Study of bone marrow in oncology. Immunologiya gemopoehza = Immunology of hemopoiesis 2014;12(1–2):18–41. (In Russ.)].

7. van Dongen J.J. M., Lhermitte L., Bottcher S. et al. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimentional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes. Leukemia 2012;26:1908–75. PMID: 22552007. DOI: 10.1038/leu.2012.120.

8. Stein H., Warnke R.A., Chan W.C. et al. Diffuse large B-cell lymphoma not otherwise specified. In: WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues (Eds. S.H. Swerdlow, E. Campo, N.L. Harris et al.). Lyon, France: IARC Press, 2008. Pp. 233–237.

9. Cheson B.D., Fisher R.I., Barrington S.F. et al. Recommendation for initial evaluation, staging, and response assessment of Hodgkin and non-Hodgkin lymphoma: The Lugano Classification. J Clin Oncol 2014;32:3059–67. PMID: 25113753. DOI: 10.1200/JCO.2013.54.8800.

10. McGrath K.E., Catherman S.C., Palis J. et al. Delineating stages of erythropoiesis using imaging flow cytometry. Methods 2017;112:68–74. PMID: 27582124. DOI: 10.1016/j.ymeth.2016.08.012.