В обзоре охарактеризованы основные типы онколитических вирусов, рассмотрены механизмы их действия на опухолевую клетку. Приведены примеры оптимизации вирусного генома с целью усиления онколитических свойств вируса. Описаны достижения в области создания противоопухолевых средств на основе онколитических вирусов и способы их применения в онкологии.

В работе обсуждаются возможные механизмы противоопухолевого действия соединений класса индолокарбазолов. Приводятся литературные данные о способности препаратов на основе производных индолокарбазолов взаимодействовать с несколькими внутриклеточными мишенями и, следовательно, индуцировать разные пути клеточной гибели. Представлены данные по изучению механизма противоопухолевого действия соединений ЛХС-1006 и ЛХС-1208, синтезированных в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России.

В обзоре представлен свод статей и патентов, описывающих новые модели пигментированной или амеланотической меланомы кожи человека in vitro и in vivo, полученные в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России из метастазов пациентов. Помимо фактического материала, в обзоре обсуждаются молекулярно-генетические особенности новых моделей меланомы кожи, охарактеризованных как тест-системы для предклинических исследований. Объекты, описанные в публикации – 3 поликлональные клеточные линии, 2 субклона и 4 подкожных ксенографта у иммунодефицитных мышей Balb/c nude. Все модели хранятся в криобанке НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина, а клеточные линии также в Российской коллекции культур клеток позвоночных (Санкт-Петербург). Эта мини-коллекция предназначена для фундаментальных исследований меланомы кожи и доклинических испытаний антимеланомных средств. Основанием для этого служат адекватные цитологические, иммунологические, трансплантационные и молекулярно-генетические характеристики моделей, а также их лекарственная чувствительность in vivo к соответствующей таргетной терапии.

Адъюванты – важные составляющие противоопухолевых вакцин, поскольку они усиливают иммунные ответы на вакцинацию. Однако разрешенные к применению адъюванты, например соли алюминия, недостаточно эффективно стимулируют иммунный ответ. Поиск и изучение свойств новых адъювантов, часто сочетающих в себе функции стимуляторов иммунитета с доставкой антигена к иммунным клеткам, на сегодняшний день являются актуальными задачами иммунотерапии. Клинические испытания иммуностимулирующих веществ, в частности лигандов Толл-лайк рецепторов (TLR), выявили их терапевтический потенциал не только как противоопухолевых агентов, но и как адъювантов к вакцинам.

Почечно-клеточный рак (ПКР) занимает первое место по смертности среди урогенитальных опухолей и является самым распространенным заболеванием после рака предстательной железы и мочевого пузыря. Раннее выявление ПКР позволяет сразу проводить адекватное лечение и тем самым существенно увеличивать выживаемость пациентов. В случае бессимптомного протекания своевременная диагностика ПКР на ранних стадиях, как правило, затруднена. На сегодняшний день проблема поиска молекулярных маркеров светлоклеточного ПКР, позволяющих определить стадию, метастатический потенциал и прогноз заболевания, подобрать схему лечения остается актуальной. Особый интерес представляют биомаркеры раннего выявления ПКР и его метастатического потенциала, а также маркеры, которые могут быть получены неинвазивными или минимально инвазивными методами. В данном обзоре представлены современные способы диагностики ПКР с помощью биомаркеров.

Введение. Ранее работами лаборатории иммунологии гемопоэза были установлены типичные изменения гемопоэза у больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ). Среди них особое внимание было обращено на нарастание пропорции ок сифильных нормобластов, поскольку этот признак имел прогностическое значение.

Цель исследования – установление возможности идентификации более зрелой пропорции эритрокариоцитов проточно-ци тометрическим методом.

Материалы и методы. Исследование проведено у 60 больных ДВКЛ. Увеличение пропорции оксифильных эритробластов отмечено в 50 случаях (83,3 %). Проточно-цитометрические исследования костного мозга проведены у 30 больных ДВКЛ. Использовали моноклональные антитела к гликофорину А, CD45, CD36, CD117, CD71, CD105, CD34, HLA-DR, а также ядерные красители SYTO 16, SYTO 41.

Результаты. Использование гликофорина А в сочетании с одним из ядерных красителей и CD45 является эффективным для идентификации пула эритрокариоцитов. Основную фракцию составляют зрелые CD71+ гликофорин А+ клетки, которые не имеют характеристик клеток-предшественников. Во фракции CD45-негативных клеточных элементов присутствуют клетки CD71-гликофорин А–, которые представлены предшественниками – CD34+ CD117+ HLA-DR+/–. На эритрокари оцитах со слабой экспрессией гликофорина А и выраженной экспрессией CD71 (коммитированных по эритроидной дифферен цировке) в незначительном количестве присутствуют только антигены CD117 и HLA-DR, а CD34 полностью отсутствует. Наиболее информативным для характеристики более зрелой популяции эритрокариоцитов оказался подход, основанный на идентификации пула эритрокариоцитов по экспрессии CD36 с низкими характеристиками SSC (в этом случае гликофорин А, CD45 и ядерные красители можно не использовать, так как CD36 не взаимодействует с эритроцитами). После достижения пика экспрессии уровни CD36, CD71, CD105 снижаются. Именно эта фракция представляет собой наиболее зрелые эритрокариоциты. Корреляция процентного содержания этих клеток с выявляемыми морфологически оксифильными нормобластами близка к достоверной.

Заключение. Установлено, что наиболее зрелую фракцию эритрокариоцитов целесообразно проточно-цитометрически устанавливать на основании следующих характеристик: SSClow CD71low CD105low CD36+/low.

Введение. Увеличение процентного содержания бластных клеток в миелограмме больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ) является прогностически неблагоприятным фактором. В работе оценена частота данного явления у 60 больных ДВКЛ и предпринята попытка анализа возможности выявления минимального поражения костного мозга различными проточно-цитометрическими методами.

Материалы и методы. Исследование проведено у 60 больных ДВКЛ. Диагноз во всех случаях установлен на основании критериев классификации ВОЗ. Исследование костного мозга проводилось на основании мазков пунктатов (миелограмма). Иммунофенотипические иссследования включали широкую панель моноклональных антител к В-линейным антигенам CD19, CD20, CD21, CD22, CD24, CD45, а также каппа- и лямбда-цепям иммуноглобулинов.

Результаты. Увеличение процентного содержания бластных клеток в костном мозге больных ДВКЛ установлено в 73,3 % случаев. Эта группа пациентов имела более низкие показатели выживаемости. Использованы следующие методы идентификации моноклональных В-лимфоцитов костного мозга: анализ мембранных каппа- и лямбда-цепям иммуноглобулинов в пределах CD19+ клеток, в пределах зрелых CD45++ CD20+ лимфоцитов, в пределах CD5-негативных зрелых CD20+CD45++ лимфоцитов. Анализ уровней экспрессии различных дифференцировочных антигенов зрелых В-клеток – CD20, CD21, CD22, CD24. Установлено, что в пределах зрелых В-лимфоцитов костного мозга присутствует пропорция CD21-негативных клеток.

Введение. В1-лимфоциты – субпопуляция В-клеток, на долю которой в селезенке приходится 5 % от общего числа В-клеток. В1-лимфоциты секретируют преимущественно IgM, который играет важную роль в индукции апоптоза опухолевых клеток. Спленэктомия с целью адекватной лимфодиссекции при раке желудка вызывает выраженные и длительные иммунологические нарушения. Это в первую очередь затрагивает субпопуляцию В1а-лимфоцитов, которая обеспечивает тимуснезависимый иммунный ответ.

Цель исследования – изучить особенности В-клеточного звена иммунитета у больных раком желудка.

Материалы и методы. Проанализирован субпопуляционный состав В-лимфоцитов периферической крови больных раком желудка, подвергшихся хирургическому лечению методом проточной цитометрии (Facs Can, программа Lysys II и FacsCanto II, программа Facs Diva). Клетки окрашивались одномоментно тремя моноклональными антителами, меченными различны ми флуорохромами.

Результаты. Полученные данные демонстрируют нарушение состава субпопуляций В-клеток. В группе больных со стан дартной D2-лимфодиссекцией и спленэктомией на дооперационном этапе и спустя 3 мес после операции выявлена достовер ная корреляция между относительным количеством В-лимфоцитов (p = 0,018), CD5+В-лимфоцитов (p = 0,012) и количеством CD19+CD38+-клеток (p = 0,035). Кроме того, после хирургического лечения значительно возрос процент CD5+В-лимфоци тов – с 12,9 до 21,8 %, тогда как суммарное количество CD19+ лимфоцитов и CD19+СD21+ клеток снижалось.

Введение. В настоящее время для лечения рака применяются следующие подходы: хирургическое удаление опухоли, химиотерапия, таргетная терапия и иммунотерапия. Комбинирование препаратов различных классов позволяет добиться большего терапевтического эффекта по сравнению с их применением в монорежиме. Более того, могут наблюдаться и другие эффекты, в том числе изменение уровня экспрессии белков PD–L1 и PD–L2, важных мишеней чекпойнт-терапии.

Цель исследования – оценить влияние аранозы, цисплатина и паклитаксела в монорежиме или в комбинации на изменение уровня экспрессии мРНК и белков PD–L1 и PD–L2 в клеточных линиях меланомы и сопоставить результат со степенью дифференцировки клеток и наличием или отсутствием мутаций.

Материалы и методы. Исследования проводили на клеточных линиях меланомы человека, полученных из опухолевого материала больных. Уровень экспрессии генов PD–L1 и PD–L2 оценивали методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. В реакции иммунофлуоресценции оценивали экспрессию белков PD–L1 и PD–L2. Данные анализировали методами корреляционного анализа и медианного теста.

Результаты. Уровень экспрессии гена PD–L2 прямо коррелировал со степенью дифференцировки клеток (коэффициент Пирсона 0,937, p <0,15). Активность гена PD–L1 и белков PD–L1 и PD–L2 не связана со степенью дифференцировки, а также не зависит от наличия мутаций гена TP53. PD–L2 экспрессируется на меньшем уровне в клеточных линиях, имеющих мутации гена BRAF (p = 0,0117). Интересно, что мутации в гене TP53 наблюдаются при наличии мутаций BRAF (коэффициент Пирсона 1, p <0,15). Воздействие аранозы привело к увеличению уровня экспрессии гена PD–L1 (p = 0,23). Инкубация с цисплатином в комбинации с паклитакселом также приводила к увеличению уровня экспрессии белка PD–L1 (p = 0,037). Цисплатин и паклитаксел в монорежиме не оказывали влияния на экспрессию белка PD–L1. Уровень экспрессии гена и белка PD–L2 снижался под действием любого препарата, но статистически незначимо (р = 0,6).

Введение. Раздел «Фармацевтическая разработка» является неотъемлемой частью регистрационного досье при разработке лекарственной формы, однако особое значение данный процесс приобретает для лиофилизированных лекарственных форм (ЛФ) ввиду чувствительности лиофилизации к малейшим изменениям в температурном режиме, давлении и других факторах.

Цель исследования – продемонстрировать возможности методов, показанных в ICHQ8 «Фармацевтическая разработка», ICH Q9 «Управление рисками для качества» и «Руководство по разработке и производству лекарственного препарата (фармацевтическая разработка)» (ЕврАзЭС).

Материалы и методы. Данные методы использованы при разработке лиофилизированной ЛФ для парентерального применения на основе оригинальной фармацевтической субстанции гексаметиленамид бис- (N-моносукцинил-L-глутамил-L-лизина) ГК-2, обладающей нейропротекторной активностью. Исследавания проводились при использовании субстанции ГК-2, а в качестве вспомогательных веществ применяли: лиопротектор – сахарозу, криопротекторы – среднецепочные полиэтиленгликоли (ПЭГ) 1500, 4000, 6000.

Результаты. Оценены риски, возникающие во время производства ЛФ лиофилизата для парентерального применения, на основе диаграммы причин и следствий (диаграмма Ишикавы). Исходя из диаграммы, определены основные факторы, влияющие на качество конечного продукта, а также проанализированы критические параметры процессов, критические контрольные точки и взаимосвязанные с ними критические параметры качества модельных составов лиофилизата ГК-2 для парентерального применения.

Введение. Антибиотики группы ауреоловой кислоты – высокоактивные противоопухолевые препараты. Новые данные о механизме их действия обусловили необходимость создания аналогов с улучшенными фармакологическими свойствами. В ФГБНУ «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе» были разработаны методы селективной химической модификации антибиотика группы ауреоловой кислоты оливомицина А, получен ряд полу-синтетических производных. Наиболее активное соединение – N, N-диметиламиноэтиламид 1’-дез-(2,3-дигидроксибутироил)-1’-карбокси-оливомицина А (оливамид) – было отобрано для углубленного доклинического изучения.

Цель исследования – доклиническое изучение токсикологической безопасности лекарственной формы препарата оливамид в хроническом эксперименте на кроликах.

Материалы и методы. Исследование проведено на кроликах «Советская шиншилла». Препарат в лекарственной форме вводили внутривенно ежедневно в течение 15 дней в дозах, суммарно составляющих максимально переносимую и дозу, вызывающую гибель 50 % животных (ЛД50) – (разовые дозы 0,02 и 0,04 мг/кг соответственно). В ходе исследования определяли массу тела, проводили клинический и биохимический анализ крови, анализ мочи, снимали электрокардиограмму. На 1-е и 30-е сутки по окончании курса животных подвергали эвтаназии. Проводили патоморфологическое исследование внутренних органов.

Результаты. Показано, что введение оливамида в дозе, суммарно составляющей максимально переносимую дозу, приводит к повышению активности аспартатаминотрансферазы, увеличению содержания мочевины и креатинина. При анализе мочи было отмечено появление белка, уробилиногена и увеличение удельного веса. При применении оливамида в дозе, суммарно составляющей ЛД50, помимо отмеченных выше показателей, было выявлено повышение активности щелочной фосфатазы и уровня общего билирубина. При патоморфологическом исследовании были найдены повреждения структуры печени и почек, интенсивность которых зависела от дозы препарата.

Введение. В ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России проведены доклинические токсикологические исследования лиофилизированной лекарственной формы ормустина (Ормустин) – нового противоопухолевого препарата из класса нитрозоалкилмочевин. В работе представлены результаты изучения субхронической токсичности Ормустина на крысах.

Цель исследования – изучение субхронической токсичности Ормустина на крысах при ежедневном 3-кратном внутривенном введении.

Материалы и методы. Исследование проведено на 40 неинбредных крысах-самцах. Ормустин вводили внутривенно ежедневно 3-кратно в суммарных дозах 300, 200 и 100 мг/кг. Срок наблюдения – 45 сут. На протяжении всего срока наблюдения проводили необходимые клинико-лабораторные исследования. Для изучения повреждающего действия Ормустина на органы и ткани проводили патоморфологическое исследование на 3-и и 45-е сутки наблюдения.

Результаты. Установлено, что Ормустин при многократном применении у крыс в 3 исследованных дозах обладает гемато-, нефро-, кардио- и гастроинтестинальной токсичностью. Глубина и степень повреждений, а также их обратимость зависят
от величины примененной дозы Ормустина.

Цель исследования – выявление генов, экспрессия которых ассоциирована с метастазированием опухоли рака желудка (РЖ).

Материалы и методы. Использовали метод количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени на парных образцах опухоль – норма.

Результаты. Показана ассоциация с метастазированием экспрессии генов VEGF R1, FGFR2 и NRP-1. Значение отношения шансов (ОШ) оказалось наибольшим для гена FGFR2: ОШ 175,00; 95 % доверительный интервал (ДИ) 8,972–3413,271; для гена VEGFR1 – ОШ 4,622; 95 % ДИ 1,240–17,227, для NRP1 – ОШ 2,667; 95 % ДИ 0,597–11,915. При оценке совместно повышенной экспрессии генов VEGFR1 и NRP1 – ОШ 5,778; 95 % ДИ 1,393–23,909; р = 0,0147. Частота повышенной экспрессии FGFR2 составила 5 % при диссеминированном РЖ, в то время как при локализованном РЖ она достигает 53 %.

Цель исследования – количественная оценка уровня экспрессии и коэкспрессии эстрогеновых рецепторов разных типов (ЭРα и ЭРβ) в ткани опухолей большой когорты больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ).

Материалы и методы. Исследованы хирургические образцы НМРЛ (167) иммунофлуоресцентным методом, сопряженным с проточной цитометрией. Оценен уровень экспрессии маркеров, который рассчитывали как количество специфически флуоресцирующих клеток в процентах по отношению к контролю (инкубация с вторичными антителами).

Результаты. Экспрессия ЭРα и ЭРβ выявлена в 100 % исследованных образцов НМРЛ, при этом отмечена значительная вариабельность показателей и в большинстве случаев – превышение уровня экспрессии ЭРβ в сравнении с ЭРα – в 1,5–2,0 раза и более. В целом по группе медиана показателя для ЭРα составила 19 %, а для ЭРβ – 43 %. Коэффициент ранговой корреляции Спирмена оказался равным 0,364 (р <0,001), а коэффициент корреляции Пирсона – 0,401 (р <0,001), что указывает на наличие статистически значимой прямой слабой взаимосвязи между показателями уровня экспрессии ЭРβ и ЭРα.