Разработка нового моноклонального антитела к хитиназоподобному белку YKL-39 для иммуногистохимии
Аннотация
Введение. Хитиназоподобные белки у млекопитающих образуются в зоне воспаления и опухолевого роста. Отдельные представители семейства хитиназоподобных белков изучаются как потенциальные биомаркеры опухолей (глиомы, рака предстательной железы и яичников). Одним из охарактеризованных белков данного класса является YKL-39. Известный также как хитиназа-3-подобный белок 2, YKL-39 представляет собой секреторный белок хондроцитов, принадлежащий к семейству гликозил-гидролазы 18. Его самая высокая экспрессия наблюдается в хондроцитах, синовиоцитах, легких и сердце, а также в макрофагах.
Цель исследования – получение антител к человеческому YKL-39, применимых в широком спектре методов.
Материалы и методы. Используя рекомбинантный полноразмерный человеческий YKL-39 в качестве антигена, методом гибридомной технологии мы получили мышиные моноклональные антитела 1B2G4, которые специфически связываются с YKL-39 в иммуноферментном анализе.
Результаты и заключение . Полученные антитела были успешно протестированы с использованием методов иммуноблоттинга, иммуноцитохимии, иммунофлуоресценции и иммуногистохимии с использованием парафиновых срезов. Установлено, что антитела связываются с полноразмерным белком YKL-39 и не взаимодействуют с другими хитиназоподобными белками.
Об авторах
А. Н. Грачев
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России.
Россия
115478 Москва, Каширское ш., 24.
Россия
115478 Москва, Каширское ш., 24.
Д. В. Самойлова
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России.
Россия
115478 Москва, Каширское ш., 24.
Россия
115478 Москва, Каширское ш., 24.
С. Н. Курочкин
ООО «ПраймБиоМед».
Россия
Россия
117246 Москва, Научный пр-д, 20, стр. 3.
О. В. Ковалева
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России.
Россия
115478 Москва, Каширское ш., 24.
Россия
115478 Москва, Каширское ш., 24.
Список литературы
1. Gratchev A., Schmuttermaier C., Mamidi S. et al. Expression of Osteoarthritis Marker YKL-39 is Stimulated by Transforming Growth Factor Beta (TGF-beta) and IL-4 in Differentiating Macrophages. Biomark Insights 2008;3:39–44.
2. Hu B., Trinh K., Figueira W.F. et al. Isolation and sequence of a novel human chondrocyte protein related to mammalian members of the chitinase protein family. J Biol Chem 1996;271(32):19415–20.
3. Steck E., Breit S., Breusch S.J. et al. Enhanced expression of the human chitinase 3-like 2 gene (YKL-39) but not chitinase 3-like 1 gene (YKL-40) in osteoarthritic cartilage. Biochem Biophys Res Commun 2002;299(1):109–15.
4. Knorr T., Obermayr F., Bartnik E. et al. YKL-39(chitinase 3-like protein 2), but not YKL-40(chitinase 3-like protein 1), is up regulated in osteoarthritic chondrocytes. Ann Rheum Dis 2003;62(10):995–8.
5. Colton C.A., Mott R.T., Sharpe H. et al. Expression profiles for macrophage alternative activation genes in AD and in mouse models of AD. J Neuroinflammation 2006;3:27. DOI: 10.1186/1742-2094-3-27.
6. Miyatake K., Tsuji K., Yamaga M. et al. Human YKL39 (chitinase 3-like protein 2), an osteoarthritis-associated gene, enhances proliferation and type II collagen expression in ATDC5 cells. Biochem Biophys Res Commun 2013;431(1):52–7. DOI: 10.1016/j.bbrc.2012.12.094.
7. Liu T., Larionova I., Litviakov N. et al. Tumor-associated macrophages in human breast cancer produce new monocyte attracting and pro-angiogenic factor YKL-39 indicative for increased metastasis after neoadjuvant chemotherapy. Oncoimmunology 2018;7(6):e1436922. DOI: 10.1080/2162402X.2018.1436922.
8. Kzhyshkowska J., Mamidi S., Gratchev A. et al. Novel stabilin-1 interacting chitinase-like protein (SI-CLP) is up-regulated in alternatively activated macrophages and secreted via lysosomal pathway. Blood 2006;107(8):3221–8. DOI: 10.1182/blood-2005-07-2843.
9. Renkema G.H., Boot R.G., Au F.L. et al. Chitotriosidase, a chitinase, and the 39-kDa human cartilage glycoprotein, a chitin-binding lectin, are homologues of family 18 glycosyl hydrolases secreted by human macrophages. Eur J Biochem 1998;251(1–2):504–9.
10. Uhlen M., Fagerberg L., Hallstrom B.M. et al. Proteomics. Tissue-based map of the human proteome. Science 2015;347(6220):1260419. DOI: 10.1126/science.1260419.
При поддержке: Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 17-04-01857), фонда развития Центра разработки и коммерциализации новых технологий «Сколково».
Для цитирования:
Грачев А.Н., Самойлова Д.В., Курочкин С.Н., Ковалева О.В. Разработка нового моноклонального антитела к хитиназоподобному белку YKL-39 для иммуногистохимии. Российский биотерапевтический журнал. 2019;18(2):27-31. https://doi.org/10.17650/1726-9784-2019-18-2-27-31
For citation:
Gratchev A.N., Samoilova D.V., Kurochkin S.N., Kovaleva O.V. Development of a novel monoclonal antibody against chitinase-like protein YKL-39 applicable for immunohistochemistry. Russian Journal of Biotherapy. 2019;18(2):27-31. (In Russ.) https://doi.org/10.17650/1726-9784-2019-18-2-27-31
Просмотров: 164
Послать статью по эл. почте 