Получение и характеристика моноклональных антител к ферропортину человека

Введение. Ферроптоз – это тип неапоптотической железозависимой формы регулируемой гибели клеток. Единственным экспортером железа из клеток является ферропортин, однако его вовлечение в ферроптоз клеток малоизученно. Активация или блокировка путей ферроптоза может обеспечить терапевтическую стратегию при лечении ряда заболеваний. Контроль экспрессии ферропортина позволит подобрать более эффективную терапию опухоли. Получение моноклональных антител (МкАт) к ферропортину человека поможет при дальнейшем изучении его роли в ферроптозе опухолевых клеток.

Цель исследования – получение и характеристика МкАт к ферропортину человека.

Материалы и методы. Методом гибридомной технологии получены мышиные МкАт против синтетического пептида, соответствующего участку белка ферропортина. Пептид синтезировали методом твердофазного автоматического синтеза.

Результаты. Выбран и синтезирован 15-членный пептид с последовательностью ELKQLNLHKDTEPKP (ELK). Получены конъюгаты синтетического пептида с белками-носителями. Получено 4 стабильных гибридомных клона, наработаны образцы МкАт. Образцы успешно протестированы с использованием методов проточной цитометрии, иммуноферментного анализа, электрофореза в полиакриламидном геле.

Заключение. Получены и охарактеризованы 4 антитела против ферропортина, связывающие пептид ELK. Антитела могут быть использованы в дальнейших исследованиях транспорта железа в опухолевых клетках.

1. Holohan C., Van Schaeybroeck S., Longley D., Johnston P.G. Cancer drug resistance: an evolving paradigm. Nat Rev Cancer 2013;13(10):714–26. DOI: 10.1038/nrc3599

2. Okada H., Mak T.W. Pathways of apoptotic and non-apoptotic death in tumour cells. Nat Rev Cancer 2004;4(8):592–603. DOI: 10.1038/nrc1412

3. Dixon S.J., Lemberg K.M., Lamprecht M.R. et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell 2012;149(5):1060–72. DOI: 10.1016/j.cell.2012.03.042

4. Galluzzi L., Vitale I., Aaronson S.A. et al. Molecular mechanisms of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018. Cell Death Differ 2018;25(3):486–541. DOI: 10.1038/s41418-017-0012-4

5. Halliwell B. The wanderings of a free radical. Free Radic Biol Med 2009;46(5):531–42. DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2008.11.008

6. Lisova A.E., Baranovskiy A.G., Morstadt L.M. et al. The iron-sulfur cluster is essential for DNA binding by human DNA polymerase ε. Sci Rep 2022;12(1):17436. DOI: 10.1038/s41598-022-21550-4

7. Hassannia B., Wiernicki B., Ingold I. et al. Nano-targeted induction of dual ferroptotic mechanisms eradicates high-risk neuroblastoma. J Clin Invest 2018;128(8):3341–55. DOI: 10.1172/JCI99032

8. Li J., Cao F., Yin H.L. et al. Ferroptosis: past, present and future. Cell Death Dis 2020;11(2):88. DOI: 10.1038/s41419-020-2298-2

9. Hassannia B., Vandenabeele P., Vanden Berghe T. Targeting ferroptosis to iron out cancer. Cancer Cell 2019;35(6):830–49. DOI: 10.1016/j.ccell.2019.04.002

10. Вартанян А.А. Метаболизм железа, ферроптоз, рак. Российский биотерапевтический журнал 2017;16(3):14–20. DOI: 10.17650/1726-9784-2017-16-3-14-20

11. Uniprot. URL: https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q9NP59/entry.

12. Köhler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975;256(5517):495–7. DOI: 10.1038/256495a0

13. Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry 1971;8(9):871–4. DOI: 10.1016/0019-2791(71)90454-x

14. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970;227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0