Введение. Глюкоза – один из основных источников энергии в клетках. Потребление глюкозы раковыми клетками заметно выше по сравнению с нормальными клетками и усиливается по мере злокачественного прогрессирования. Начальным этапом метаболизма глюкозы является ее транспорт через плазматическую мембрану, который опосредуется семейством транспортеров глюкозы GLUT. Исследование механизмов активации GLUT представляет собой многообещающий подход к дифференциальному блокированию регулируемого глюкозой метаболизма в раковых клетках. В данной работе мы исследовали зависимость эффективности синтеза аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) и регуляции экспрессии генов классических «переносчиков глюкозы» GLUT1 – GLUT4 от количества глюкозы в культуральной среде в миеломных клетках человека RPMI8226.

Цель исследования – изучение влияния глюкозы на синтез АТФ и регуляцию экспрессии генов – транспортеров глюкозы GLUT1, GLUT2, GLUT3, GLUT4 в клетках множественной миеломы человека RPMI8226.

Материалы и методы. В работе использовали линию миеломных клеток человека RPMI8226. Жизнеспособность клеток оценивали колориметрическим методом. Влияние глюкозы на синтез АТФ в клетках определяли люминесцентным методом. Экспрессию матричной РНК в клетках изучали методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Результаты. В ходе исследования установлено, что синтез АТФ в клетках RPMI8226 зависит от метаболизма глюкозы. Снижение жизнеспособности клеток RPMI8226 строго коррелирует со снижением содержания новосинтезируемой АТФ. Для указанной линии клеток характерна относительно высокая исходная экспрессия гена GLUT1 и гена GLUT3, относительно умеренная – гена GLUT2, и относительно слабая – гена GLUT4. Исследования по деприваци глюкозы выявили активацию экспрессии всех указанных генов транспортеров глюкозы, однако наиболее высокая экспрессия была характерна для генов GLUT2 и GLUT4.

Заключение. На основании исследования мы заключаем, что для миеломных клеток RPMI8226 глюкоза является одним из важных источников энергии. Экспрессия генов транспортеров глюкозы GLUT1, GLUT2, GLUT3, GLUT4 зависит от концентрации глюкозы, однако исходный уровень экспрессии не предсказывает характер ее изменений при глюкозной депривации.

Введение. Пневмолизин (Ply) – бактериальный холестеролзависимый цитолизин, продуцируемый практически всеми штаммами Streptococcus pneumoniae. Антитела, индуцированные к Ply, способны в определенной степени нейтрализовать его патогенное действие на клетки.

Цель исследования – изучить действие моноклональных антител (МкАт), полученных к нативной (натPly) и рекомбинантной (рекPly) формам Ply, на нейтрализацию цитолитической активности бактериального Ply in vitro и их превентивные свойства при заражении мышей вирулентным штаммом S. pneumoniae.

Материалы и методы. МкАт к натPly- и рекPly-форме получали из асцитной жидкости мышей. Поликлональные антитела ПкАт (рекPly) получали из сыворотки кроликов, иммунизированных рекPly. Ингибирование гемолиза эритроцитов оценивали по минимальной концентрации МкАт (натPly), МкАт (рекPly) и ПкАт (рекPly), предотвращающей лизис эритроцитов, индуцированный натPly. Нейтрализующую способность антител оценивали на клетках яичника китайского хомячка CHO-K1 по минимальной концентрации антител, необходимых для защиты клеток от 4 цитопатогенных доз натPly. Протективные свойства антител исследовали при однократном внутрибрюшинном введении мышам 200 мкг антител с последующим заражением летальной дозой S. pneumoniae.

Результаты. Показано, что через 24 ч после внутрибрюшинного введения мышам натPly снижалась масса тела животных и появлялись дегенеративные формы эритроцитов в крови. В опытах in vitro натPly вызывал гемолиз эритроцитов и разрушение клеток CHO-K1 по механизму апоптоза. МкАт (натPly), МкАт (рекPly) и ПкАт (рекPly) ингибировали гемолиз эритроцитов и нейтрализовали разрушение клеток CHO-K1. Наиболее высокой нейтрализующей активностью характеризовались МкАт (рекPly) и ПкАт (рекPly). Однократное введение мышам исследованных антител вызывало замедление их гибели при заражении штаммом S. pneumoniae. Различий в протективной активности антител не выявлено.

Заключение. Методы, основанные на нейтрализации токсического действия Ply S. pneumoniae с помощью антител, можно рассматривать как инструмент снижения патогенности пневмококка.

Введение. Ферроптоз – это тип неапоптотической железозависимой формы регулируемой гибели клеток. Единственным экспортером железа из клеток является ферропортин, однако его вовлечение в ферроптоз клеток малоизученно. Активация или блокировка путей ферроптоза может обеспечить терапевтическую стратегию при лечении ряда заболеваний. Контроль экспрессии ферропортина позволит подобрать более эффективную терапию опухоли. Получение моноклональных антител (МкАт) к ферропортину человека поможет при дальнейшем изучении его роли в ферроптозе опухолевых клеток.

Цель исследования – получение и характеристика МкАт к ферропортину человека.

Материалы и методы. Методом гибридомной технологии получены мышиные МкАт против синтетического пептида, соответствующего участку белка ферропортина. Пептид синтезировали методом твердофазного автоматического синтеза.

Результаты. Выбран и синтезирован 15-членный пептид с последовательностью ELKQLNLHKDTEPKP (ELK). Получены конъюгаты синтетического пептида с белками-носителями. Получено 4 стабильных гибридомных клона, наработаны образцы МкАт. Образцы успешно протестированы с использованием методов проточной цитометрии, иммуноферментного анализа, электрофореза в полиакриламидном геле.

Заключение. Получены и охарактеризованы 4 антитела против ферропортина, связывающие пептид ELK. Антитела могут быть использованы в дальнейших исследованиях транспорта железа в опухолевых клетках.

Введение. Длинноволновые флуоресцентные белки наиболее перспективны при исследованиях in vivo на флуоресцирующих моделях опухолей лабораторных животных. Если экспрессирующие флуоресцентные белки опухоли имеют большую иммуногенность для данной линии иммунокомпетентных мышей по сравнению с исходными, то сложно вычленить иммунную составляющую противоопухолевого действия цитотоксической терапии.

Цель исследования – получение мышиных опухолевых клеточных линий 4T1, стабильно экспрессирующих исходный красный флуоресцентный белок TagRFP и мутантный белок TagRFP-L228A, получение опухолевых моделей на их основе и оценка гуморального иммунного ответа мышей линии Balb / c на такие опухоли.

Материалы и методы. Эукариотические плазмиды pcDNA3, содержащие гены, кодирующие экспрессию исходного белка TagRFP (TagRFP-WT) и белка с мутацией L228A (TagRFP-L228A), получали из прокариотических плазмид генно-инженерными методами. Индивидуальные клоны опухолевых клеток 4T1, экспрессирующие TagRFP-WT и TagRFP-L228A, получали путем последовательной липосомальной трансфекции клеток эукариотическими плазмидами, селекции и клонирования. Опухолевые модели получали подкожной инокуляцией суспензии клеток 4T1, 4T1-TagRFP-WT и 4T1-TagRFP-L228A самкам мышей Balb / c. Через 4 нед оценивали иммунный ответ на белок TagRFP методом иммуноферментного анализа по связыванию сывороток венозной крови мышей с исходным белком TagRFP-WT.

Результаты. Получены плазмиды для экспрессии белков TagRFP-WT и TagRFP-L228A в эукариотических клетках и клоны клеток 4T1, стабильно экспрессирующие эти белки. После инокуляции клеток 4T1-TagRFP-WT, 4T1-TagRFP-L228A и 4T1 опухоли развились у всех мышей соответствующих групп. Методом иммуноферментного анализа на планшетах с адсорбированным белком TagRFP-WT показано наличие у мышей Balb / c с флуоресцирующими опухолями гуморального иммунного ответа на исходный флуоресцентный белок в отличие от такового у мышей с опухолями 4T1. По сравнению с сыворотками мышей с опухолью 4T1-TagRFP-WT связывание с исходным белком TagRFP-WT сывороток мышей с опухолями 4T1-TagRFP-L228A уменьшается более чем в 4 раза.

Заключение. Единственная аминокислотная замена L228A в белке TagRFP приводит к существенному уменьшению гуморального иммунного ответа на экспрессируемый опухолями белок TagRFP-L228A по сравнению с исходным TagRFP-WT. Это позволит использовать экспрессирующие TagRFP-L228A клеточные линии для создания оптимизированных опухолевых моделей для мышей Balb / c.

Введение. Исследование новых представителей N-гликозидов индоло[2,3-а]карбазола, обладающих широким спектром биологической активности, остается актуальным направлением в создании высокоэффективных противоопухолевых препаратов.

Цель исследования – оценка эффективности лиофилизированной лекарственной формы нового производного N-гликозид индолокарбазола 6-пиколинамидо-12-(β-D-ксилопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион (ЛХС-1269-лио) на перевиваемой аденокарциноме толстой кишки мышей (АКАТОЛ) и ксенографтах рака ободочной кишки человека SW620.

Материалы и методы. В исследованиях на самках мышей Balb / c с перевитой подкожно АКАТОЛ использовали режим однократного внутривенного введения ЛХС-1269-лио в дозах 80, 90, 100 и 120 мг / кг и ежедневного 5-кратного – в дозах 80 и 90 мг / кг. Изучение эффективности ЛХС-1269-лио на SW620 проводили в дозах 60 и 90 мг / кг при ежедневном 5-кратном внутрибрюшинном введении мышам-самцам Balb / c nude с подкожно перевитыми ксенографтами SW620. Противоопухолевый эффект оценивали по торможению роста опухолей и увеличению продолжительности жизни животных, получавших ЛХС-1269-лио, по сравнению с контрольными. Результаты. При однократном воздействии доз 80, 90, 100 и 120 мг / кг на АКАТОЛ наблюдали дозозависимый достоверный противоопухолевый эффект ЛХС-1269-лио по отношению к контрольной группе мышей. ЛХС1269-лио при 5-кратном внутривенном введении в дозах 80 и 90 мг / кг (суммарные дозы 400 и 450 мг / кг) достоверно ингибировал рост АКАТОЛ на 89–88 и 86–84 % (p <0,05) в течение 30 сут наблюдения и увеличивал продолжительность жизни мышей Balb / c на 36 и 54 % соответственно. Результативность применения ЛХС1269-лио в суммарной дозе 450 мг / кг на АКАТОЛ подтверждена активностью ЛХС-1269-лио на ксенографтах SW620 у мышей Balb / c nude с торможением роста опухолей 72,9–71,0 % (p <0,05) в течение 8 сут наблюдения.

Заключение. Результаты оценки противоопухолевой активности ЛХС-1269 в лиофилизированной лекарственной форме на модели перевиваемой АКАТОЛ и на подкожных ксенографтах рака ободочной кишки человека SW620 позволяют продолжить доклинические исследования препарата.

Введение. Ключевым компонентом фармацевтической разработки являются оптимизация и обоснование технологических процессов, поскольку влияние критических параметров процесса на критические параметры качества составляет одно из измерений проектного поля, в рамках которого создается лекарственный препарат. В данном исследовании показана взаимосвязь между условиями влажного гранулирования и характеристиками таблеток ГСб-106.

Цель исследования – изучить влияние критических параметров процесса влажного гранулирования на основные показатели таблеток ГСб-106 при разработке оптимального технологического режима, используя план бокса–бенкена.

Материалы и методы. Используемое оборудование: высокоскоростной смеситель-гранулятор GSL-12 (Etorch, Китай), гранулятор с функцией просеивания WG-30 (Pharmag, Германия), ручной гидравлический пресс ПРГ-50 (Россия), анализаторы: прочности – TBF 1000 (Copley Scientific, Великобритания), распадаемости – SVM 221 (ERWEKA, Германия), истираемости – PTF 3DR (Pharma Test, Германия). Математическое планирование эксперимента осуществляли с использованием метода поверхностного отклика с трехуровневым планом бокса–бенкена, применяли регрессионный и дисперсионный анализ, многокритериальную оптимизацию с помощью обобщенной желательности по Дерринжеру–Суичу.

Результаты. Для разработки технологического процесса проведено 15 экспериментов во всем диапазоне варьирования факторов, таких как продолжительность перемешивания, скорость вращения лопастей, количество гранулирующего раствора. Изучали следующие фармацевтико-технологические характеристики: прочность таблеток на раздавливание и распадаемость при давлении прессования 5 и 10 кН / м², а также истираемость. Исходя из полученных данных, разрабатывали уравнения регрессионного анализа для каждой изучаемой характеристики, сравнивали полученные модели по коэффициентам детерминации, оценивали статистическую значимость членов уравнений и оптимизировали уравнения регрессии путем избавления от статистически незначимых членов уравнения. После построения математической модели с адекватной прогностической способностью проводили многокритериальную оптимизацию с помощью обобщенной желательности по Дерринжеру–Суичу.

Заключение. Многокритериальная оптимизация позволила определить наиболее оптимальное сочетание управляющих факторов в соответствии с приоритизацией желательности фармацевтико-технологических характеристик. Выявленный оптимальный технологический режим заключается во введении 68,7 мл воды очищенной во время гранулирования и перемешивания таблеточной смеси в течение 9,9 мин со скоростью вращения лопастной мешалки 200 об / мин. Перечисленные параметры процесса обеспечивают наиболее оптимальные фармацевтико-технологические характеристики таблеток.

Введение. Известно, что у онкологических больных при диагностике заболевания часто выявляется анемический синдром (АС). Последний наряду с размером опухоли и стадией заболевания рассматривают как независимый фактор прогноза, влияющий на выживаемость.

Цель исследования – анализ гематологических параметров периферической крови и показателей феррокинетики для уточнения роли гепсидина-25 (ГП-25), интерлейкина 6 (ИЛ-6) в ранней и дифференциальной диагностике вариантов АС у больных раком прямой кишки (РПК).

Материалы и методы. Исследование проведено у 32 больных РПК до лечения. Гематологические параметры периферической крови исследовали на анализаторе Sysmex XE-2100 (Япония). Концентрации ферритина, ГП-25, ИЛ-6, эритропоэтина определяли в плазме крови с помощью иммуноферментного метода.

Результаты. Почти у 1 / 2 (47 %) больных РПК выявлен АС в 2 вариантах: железодефицитная анемия и функциональный дефицит железа (ФДЖ). Для всех вариантов были характерны микроцитоз, гипохромия эритроцитов и ретикулоцитов, что свидетельствовало о железодефицитном эритропоэзе. Однако у больных с III–IV стадией заболевания и ФДЖ концентрация ферритина, ГП-25, ИЛ-6, количество фрагментоцитов эритроцитов оказалась статистически значимо выше, а уровни эритроцитов, гемоглобина, гематокрита ниже, чем у больных с железодефицитной анемией. Это указывало на длительный процесс формирования АС или анемию хронического заболевания с ФДЖ. Отклонения от референсного значения уровня ГП-25 и ферритина выявлены не только у больных с АС, но и у отдельных больных без гематологических признаков анемии, что не исключало латентной стадии АС. Дефицит эритропоэтина относительно степени тяжести АС установлен во всех вариантах.

Заключение. Исследование было малочисленным, что не позволяет сделать однозначный вывод о роли ГП-25 и ИЛ-6 в патогенезе варианта АС с ФДЖ у больных РПК и требует дальнейшего изучения.

Цель исследования – оценить прогностическую значимость экспрессии маркеров эпителиально-мезенхимального перехода TWIST и E-кадгерина в первичных опухолях у пациентов с меланомой кожи ранних стадий и распространенным раком прямой кишки, выявить связь экспрессии с клинико-морфологическими характеристиками опухоли, риском прогрессирования и ответом на проводимое лечение.

Материалы и методы. Проведен ретроспективный анализ данных 2 когорт пациентов. Первая когорта включала 101 пациента с меланомой кожи с распространенностью первичной опухоли pT1a–1b. Вторая когорта – 75 пациентов с распространенным раком прямой кишки (T3–4N0–2M0), получивших неоадъювантную химиолучевую терапию. Во всех случаях проводили иммуногистохимическую оценку экспрессии TWIST и E-кадгерина в первичных опухолях. Анализировали связь с прогрессированием заболевания, эффектом терапии и морфологическими характеристиками.

Результаты. У пациентов с меланомой кожи снижение экспрессии E-кадгерина (<80 %) и повышение TWIST

(>20 %) ассоциировалось с риском прогрессирования заболевания в течение 5 лет (p <0,01). При раке прямой кишки аналогичные профили экспрессии коррелировали с худшим эффектом от химиолучевой терапии (tumor regression grading: 3–4), низким уровнем патоморфоза, а также со снижением общей и безрецидивной выживаемости (p <0,05). TWIST и E-кадгерин демонстрируют независимую прогностическую значимость при обоих типах опухоли.

Заключение. Изменение экспрессии маркеров TWIST и E-кадгерина в первичных опухолях отражает активацию эпителиально-мезенхимального перехода, ассоциированного с агрессивным клиническим течением, сниженной чувствительностью к терапии и повышенным риском прогрессирования. Эти маркеры могут быть использованы для уточнения стратификации риска и индивидуализации лечебной тактики.

Введение. Исследование минимальной остаточной болезни (МОб) – необходимый этап детального анализа персистенции опухолевого клона в костном мозге больных множественной миеломой (ММ), что важно для оценки глубины ремиссии на фоне лечения. Оценка МОб может быть полезной для построения прогноза ММ и выбора тактики ведения больных.

Цель исследования – оценка частоты МОб и ее прогностической значимости у больных ММ в процессе лечения.

Материалы и методы. В исследование включены 56 больных ММ, средний возраст которых составлял 54,9 ± 1,3 года. Все больные получали индукционную химиотерапию (ИХТ), которую проводили по схеме Vrd. После ИХТ и через 100 дней после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) оценивали статус МОб. Оценка МОб-статуса выполнена методом многоцветной проточной цитометрии (FACSCanto II, программа Kaluza Analysis v2.1, США). Моноклональные антитела: CD45, CD19, CD27, CD56, CD28, CD38, CD117, CD19, CD81, легкие цепи иммуноглобулина κ / λ, 7AD (Becton Diсkinson, США).

Результаты. Частота МОб-негативного статуса после ИХТ составила 35,7 %, после ауто-ТГСК – 56,7 %. Отмечено снижение количества аномальных плазматических клеток (ПК) в костном мозге в 1,3 раза по сравнению с этапом ИХТ. Установлена конверсия МОб-позитивных случаев на фоне лечения. В группе с содержанием ПК в костном мозге после ИХТ от 0,01 до 0,1 % МОб-статус изменился после ауто-ТГСК и стал негативным у 53 % пациентов. При наличии более 0,01 % ПК после ИХТ частота прогрессирования возросла более чем в 2 раза и составила 50,0 % (р <0,05). Среднее число ПК у пациентов без прогрессирования болезни, выявляемых после ауто-ТГСК, было значительно меньше – 0,02 % против 0,31 %, р <0,05.

Заключение. Частота МОб-негативного статуса на этапе ИХТ и после ауто-ТГСК отличается, поэтому важны несколько точек контроля. После аутоТГКС наблюдают конверсию МОб-позитивных случаев в негативные. Прогрессирование ММ наблюдалось достоверно чаще при МОб-позитивном статусе. Мониторинг МОб может помочь в выборе кандидатов на присоединение поддерживающего лечения ММ.