ТРАНСФЕКЦИЯ IN VITRO ЭКЗОГЕННОЙ ДНК КЛЕТОК ЯЙЦЕВОДА КУР

Аннотация

Получение фармакологических белков из белка яйца трансгенной птицы представляет собой довольно сложную и дорогостоящую технологию, в одну из основных задач которой входит создание экспрессирующего вектора. Целью исследований являлось получение и оценка временной экспрессирующей системы на основе первичной культуры трансфецированных экзогенной ДНК эпителиальных клеток куриного яйцевода. Было изучено три способа выделения клеток яйцевода кур, при этом только при получении клеток методом инкубации фрагмента яйцевода курицы в растворе Трипсина-Версена при 38 °С, при механическом удалении верхнего слоя клеток с его внутренней поверхности удалось получить гомогенную, стабильную первичную культуру, способную к многократным пассажам. Через 2-3 суток монослой пассировали и еще через 1-2 суток уже использовали для трансфекции. Получение культуры не требовало поэтапной или комплексной обработки яйцевода ферментами, дополнительного оборудования и реактивов для удаления стромальных клеток. Культура клеток яйцевода была успешно трансфецирована с помощью генной конструкции на основе вектора pIRES EGFP2 (фирма Clontech, США) и препарата липосом «Lipofectamin® 2000», при этом число экспрессирующих белок GFP эпителиальных клеток яйцевода составил 5-8 % от общего числа трансфецированных клеток. С помощью разработанной временной экспрессирующией системы в течение 4-5 суток в условиях in vitro было проведено тестирование экспрессии экзогенного гена.