TRANSFECTION OF EXOGENOUS DNA IN CHICKEN OVIDUCT CELLS IN VITRO
https://doi.org/10.17650/1726-9784-2015-14-1-29-31
Abstract
Effective production of pharmaceutical proteins using transgenic poultry may be achieved only from a construction of expression vector for chicken oviduct bioreactor. This study was focused on development of temporary expression system by using primary oviduct epithelial cells in which transfected gene expression can be studied. The present work was aimed to study three manners for preparation of primary oviduct cells, but only one was effective. Selective digestion of chicken oviduct tissue pieces in trypsin at 38° C and mechanical withdrawal of upper cell layer resulted in the isolation of purity primary culture. Experiments indicated that monolayer cultured for 2-3 d were fit to be passaged. Then after 1-2-d, the cells were transfected. Based on our result with primary culture, we did not used complicated enzyme treatment and extra equipment in order to increase the purity of epithelial cells. Liposomes «Lipofectine® 2000» were used for primary oviduct cells transfection of a plasmid designed based on the pIRES EGFP2 vector (Clontech, United States). The ratio of cells carrying GFP activity was 5-8% of the total number of cultured cells. This researches was focused on development in vitro of temporary expression system in which transfected gene expression can be tested for 4-5 d.
About the Authors
A. V. Samoilov
FSBSI Institute of Canning Technology, Vidnoe, Moscow region
Russian Federation
Russian Federation
N. M. Suraeva
FSBSI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center»
Russian Federation
Russian Federation
References
1. Самойлов A.B., Сураева Н.М., Барышников А.Ю. и др. Использование сперматозоидов петуха в качестве переносчиков чужеродной ДНК с целью разработки и совершенствования методов получения продуцентов терапевтических белков // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3. - С. 53-6.
2. Самойлов A.B., Кесян А.З., Сураева Н.М. Получение трансгенных кур с геном гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека методом опосредованного генного переноса с помощью сперматозоидов // Известия Российской академии наук. Серия биологическая. - 2013. - № 5. - С. 517-21.
3. Сураева Н.М. Современные подходы к проблеме введения чужеродных генов в половые клетки животных // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 4. - С. 29-37.
4. Сураева Н.М., Толмазова А.Г. Выделение и характеристика первичных половых клеток из гонад 6 -9-суточных эмбрионов кур с целью совершенствования метода получения трансгенной птицы // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2004. - № 2. - С. 29-31.
5. Сураева Н.М., Бырышников А.Ю., Фисинин В.И., Прокофьев М.И. Изучение эффективности различных способов переноса репортерного гена в эмбриональные клетки кур // Известия Российской академии наук. Серия биологическая. - 2008. - № 1. - С. 18-23.
6. Сураева Н.М., Самойлов A.B. Получение фармацевтических белков с помощью трансгенной птицы // Вестник РОНЦ им. Блохина H.H. РАМН. - 2009. - Т. 20, № 4. - С. 19-25.
7. Фрешни Р.Я. Культура животных клеток. Практическое руководство. - М.: Бином. Лаборатория знаний, 2010. - 691 с.
8. Gao B., Sun H.C., Song C.Y. et al. Transfection and expression of exogenous gene in laying hens oviduct in vitro and in vivo // Journal of Zhejiang University Science. - 2005. - 6(2). - P. 137-41.
9. Kim S.H., Choi J.Y., Sihn C.R. et al. Induction of apoptosis in chicken oviduct cells by C2-11. ceramide // Mol. Cells. - 2005. - 19(2). - P. 185-90.
10. Li S., Zhenyu A M., Zhang A. et al. Induction of CXC chemokine messenger-RNA expression in chicken oviduct epithelial cells by salmonella enterica serovar enteritidis via the type three secretion system-1 // AVIAN DISEASES. - 2009. - 53. - P. 396-404.
11. Oishi I., Sungtae S., Yoshii K. et al. cre-loxp-regulated expression of monoclonal antibodies driven by an ovalbumin promoter in primary oviduct cells // bmc biotechnology. - 2011. - 11(5). - p. 1-8.
12. Prokofiev M.I., Ernst L.K., Suraeva N.M. et al. Bovine oocyte maturation, fertilization and further development in vitro and after transfer into recipient // Theriogenology. - 1992. - 38. - P. 461-9.
Review
For citations:
Samoilov A.V., Suraeva N.M. TRANSFECTION OF EXOGENOUS DNA IN CHICKEN OVIDUCT CELLS IN VITRO. Russian Journal of Biotherapy. 2015;14(1):29-31. (In Russ.) https://doi.org/10.17650/1726-9784-2015-14-1-29-31
Views:
318
Email this article 
