Изменение морфологических, иммунологических и генетических характеристик клеток меланомной линии (Mel Ibr) при культивировании в ростовой среде с низкой концентрацией эмбриональной телячьей сыворотки

Цель исследования - изучение изменения фенотипических и генетических характеристик клеток меланомы Mel Ibr при культивировании в ростовой среде со сниженной концентрацией эмбриональной телячьей сыворотки до 5 %. Материалы и методы. Клетки линии Ме1 Ibr для селекции колоний веретеновидных клеток предварительно культивировали в среде RPMI-1640 с 5 % эмбриональной телячьей сыворотки в течение 3 пассажей, а затем рассеивали на чашки в дубликатах диаметром 60 мм в количестве 200-400 клеток на чашку Петри и оставляли в инкубаторе на 14 дней до образования колоний. Каждую из сформировавшихся колоний, состоящих из клеток веретеновидной формы, продолжали культивировать в тех же условиях на протяжении более 30 пассажей. Для исследования морфологии растущих клеток их окрашивали по методу Лейшмана. Экспрессию антигенов на клетках определяли в реакции непрямой иммунофлуоресценции. Результаты. При культивировании клеток меланомной линии человека Mel Ibr в ростовой среде со сниженным содержанием эмбриональной телячьей сыворотки до 5 % получен субклон, клетки которого сравнивали по морфологическим, иммунологическим и цитогенетическим характеристикам с клетками родительской линии. Клетки субклона отличались веретеновидной формой, значительно меньшим размером, большим ядром, занимающим практически весь объем цитоплазмы, и образованием в процессе роста колоний сфероидного типа, а также резким уменьшением HLA-DR+ клеток, уменьшением процентного содержания CD-54+ клеток, увеличением CD-63+ клеток и появлением CD-133+ клеток. Кариотип клеток субклона значительно отличался от кариотипа родительской популяции. Выводы. В результате проведенных исследований выявлено, что клетки полученного субклона обладают признаками стволовых клеток и могут быть использованы в качестве модели для изучения опухолевой прогрессии.

сыворотка, клеточная линия меланомы, опухолевая стволовая клетка, субклон, serum, melanoma cell line, tumor stem cell, subclone

1. Геращенко Т.С., Денисов Е.В., Литвяков Н.В. и др. Внутриопухолевая гетерогенность: природа и биологическое значение. Биохимия 2013;78(11):1531-49.

2. Сураева Н.М., Морозова Л.Ф., Самойлов А.В. и др. Изменение морфологических и иммунологических характеристик клеток меланомной линии (MEL IBR) в результате воздействия куриного эмбрионального экстракта. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2015;159(4):521-4.

3. Сураева Н.М., Самойлов А.В. Получение фармацевтических белков с помощью трансгенной птицы. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 2009;20(4):19-25.

4. Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференциро-вочным антигенам лимфоцитов человека. Гематология и трансфузиология 1990;8:4-7.

5. Short protocols in human genetics: a compendium of methods from current protocols in human genetics. N.C. Dracopoli et al. (eds.). New York: Willey, 2004.