Preview

Российский биотерапевтический журнал

Расширенный поиск
Том 15, № 2 (2016)
https://doi.org/10.17650/1726-9784-2016-15-2

ОБЗОРЫ ЛИТЕРАТУРЫ

82-89 48
Аннотация
Целью работы являются анализ данных литературы об особенностях меланоцитарных новообразований кожи детей и подростков для оценки актуальности поиска диагностических молекулярных маркеров меланомы кожи у таких пациентов, а также (в случае утвердительного заключения) характеристика потенциального комплекса таких маркеров. Меланома кожи у детей и подростков представляет собою гетерогенную группу опухолей, которые по сравнению с меланомой кожи у взрослых больных имеют как некоторые черты сходства, так и существенные отличия. Дифференциальная диагностика пигментного невуса и меланомы по-прежнему вызывает у специалистов затруднения, которые можно было бы минимизировать с помощью молекулярных маркеров. В качестве возможных подходов в составе комплекса маркеров, предназначенных для дифференциальной диагностики невусов и меланомы кожи у детей, представляется целесообразным проводить детекцию в меланоцитарных новообразованиях кожи нарушений в локусе INK4a/ARF и иммуногистохимическое (ИГХ) исследование белка p16INK4a, выявление амплификаций хромосомного участка 11q13 и ИГХ-детекцию циклина D1 (белка CCND1) в клеточных ядрах, а также ИГХ-выявление HLAI класса на поверхности клеток пигментных новообразований.
90-96 63
Аннотация
Направленная доставка противоопухолевых препаратов к опухолевым клеткам-мишеням кажется весьма многообещающим способом терапии злокачественных новообразований. Исследования по применению иммунолипосом в качестве наноконтейнеров для лекарств начались еще в 90-е гг. ХХв. Иммунолипосомальная лекарственная форма противоопухолевых лекарств имеет преимущества перед традиционными лекарственными формами: благодаря липидной оболочке снижается токсичность препарата, за счет селективной доставки в опухолевую ткань повышается его биодоступность. Однако, несмотря на эти преимущества, на сегодняшний день иммунолипосомальные препараты не используются в клинике. В обзоре рассматриваются современные исследования в области разработки и изучения иммунолипосомальных противоопухолевых препаратов и мишеней для направленной доставки.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

6-15 61
Аннотация
Введение. Злокачественный фенотип опухолевых клеток и метастатический потенциал опухоли определяются генетическими факторами. В дополнение к ним значимую роль в регуляции структурных и функциональных характеристик злокачественных клеток играют компоненты нормальной биологической среды, в том числе и наноразмерные везикулы, или экзосомы. Цель исследования - изучение механизмов и оценка эффекта влияния экзосом плазмы на клетки рака молочной железы в условиях in vitro. Материалы и методы. В исследовании использованы культура клеток рака молочной железы MDA-MB-231 и экзосомы, выделенные из плазмы или культуральной среды. Для анализа экзосом применялись методы корреляционной спектроскопии, вестерн-блоттинг. Функциональные эффекты экзосом оценивались в экспериментах in vitro и in vivo. Результаты. В представленной работе показано, что экзосомы плазмы стимулируют адгезивную и двигательную активность клеток рака молочной железы, потенцируя процесс метастатической диссеминации. Для реализации стимулирующего эффекта достаточно контактного взаимодействия, которое опосредовано фибронектином на поверхности экзосом и цитоплазматическим сигнальным каскадом, зависимым от киназы фокальной адгезии. Выводы. Углубленное изучение роли экзосом плазмы или межклеточной жидкости в формировании и регуляции злокачественного фенотипа клеток опухоли может открыть перспективы разработки новых методов терапии онкологических заболеваний.
16-18 32
Аннотация
Введение. Бета-IIIтубулин (TUBB3) - одна из 8 изоформ белка микротрубочек бета-тубулина, экспрессирующаяся в организме взрослого человека исключительно в нейронах и клетках Сертоли. В то же время экспрессия TUBB3 выявляется в клетках солидных опухолей, в частности немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ), где его экспрессию обычно связывают с неблагоприятным прогнозом и устойчивостью к терапии препаратами платины и таксанами. Цель исследования - проверка выдвинутой нами гипотезы, что TUBB3 может экспрессироваться не только в первичном опухолевом узле, но и за его пределами. Исследовано 60 хирургических биопсийньх образцов немелкоклеточного рака легкого и морфологически нормальной окружающей ткани 30пациентов, оперированных в ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Материалы и методы. Образцы переводили в одноклеточную суспензию, фильтровали, фиксировали в 4 % растворе формальдегида, окрашивали моноклональными антителами к TUBB3 и анализировали методом проточной цитофлуориметрии, разработанным в лаборатории медицинской химии НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. Н.Н. Блохина и запатентованным. Результаты. Экспрессия TUBB3 в группе образцов НМРЛ была выше, чем в группе образцов морфологически нормальной ткани. Тем не менее в подавляющем большинстве образцов морфологически нормальной ткани (25 из 30) TUBB3 экспрессировался, достигая значения в 39 % окрашенных клеток. Выводы. В целом, полученные данные свидетельствуют о принципиальной возможности присутствия ТиВВ3-позитивных клеток за пределами первичной опухоли - в ткани, визуально не вовлеченной в опухолевый процесс.
19-23 31
Аннотация
Цель исследования - изучение изменения фенотипических и генетических характеристик клеток меланомы Mel Ibr при культивировании в ростовой среде со сниженной концентрацией эмбриональной телячьей сыворотки до 5 %. Материалы и методы. Клетки линии Ме1 Ibr для селекции колоний веретеновидных клеток предварительно культивировали в среде RPMI-1640 с 5 % эмбриональной телячьей сыворотки в течение 3 пассажей, а затем рассеивали на чашки в дубликатах диаметром 60 мм в количестве 200-400 клеток на чашку Петри и оставляли в инкубаторе на 14 дней до образования колоний. Каждую из сформировавшихся колоний, состоящих из клеток веретеновидной формы, продолжали культивировать в тех же условиях на протяжении более 30 пассажей. Для исследования морфологии растущих клеток их окрашивали по методу Лейшмана. Экспрессию антигенов на клетках определяли в реакции непрямой иммунофлуоресценции. Результаты. При культивировании клеток меланомной линии человека Mel Ibr в ростовой среде со сниженным содержанием эмбриональной телячьей сыворотки до 5 % получен субклон, клетки которого сравнивали по морфологическим, иммунологическим и цитогенетическим характеристикам с клетками родительской линии. Клетки субклона отличались веретеновидной формой, значительно меньшим размером, большим ядром, занимающим практически весь объем цитоплазмы, и образованием в процессе роста колоний сфероидного типа, а также резким уменьшением HLA-DR+ клеток, уменьшением процентного содержания CD-54+ клеток, увеличением CD-63+ клеток и появлением CD-133+ клеток. Кариотип клеток субклона значительно отличался от кариотипа родительской популяции. Выводы. В результате проведенных исследований выявлено, что клетки полученного субклона обладают признаками стволовых клеток и могут быть использованы в качестве модели для изучения опухолевой прогрессии.
24-31 47
Аннотация
Цель исследования - изучить in vivo противоопухолевую активность лекарственной формы нового препарата из класса ни-трозоалкилмочевин «Ормустина» (алкилнитрозокарбамоил производного аминокислоты L-орнитин) на мышах с перевиваемыми лимфолейкозами. Материалы и методы Оценку потенциальной противоопухолевой активности ормустина проводили на мышах B6D2F1 с асцитными (L1210, L1210/ араноза, L1210/ нитруллин и P388) и солидными (P388) формами лимфолейкозов. В работе были использованы препараты из группы производных нитрозоалкилмочевины: ормустин, араноза и лизомустин. Лечение животных начинали через 24 ч после прививки лейкозов внутрибрюшинно и через 48 ч после прививки P388 подкожно. Препараты в широком диапазоне доз вводили мышам однократно внутривенно. Наблюдение за животными продолжали до их гибели. Критериями оценки противоопухолевого эффекта служили увеличение продолжительности жизни опытных мышей по сравнению с контрольными и их излечение. Результаты Исследована противоопухолевая активность нового препарата класса нитрозалкилмочевин «Ормустин». Влияние ормустина изучено in vivo на рост перевиваемых штаммов лимфолейкозов мышей: L1210 (асцитный вариант) и P388 (асцитный и солидный варианты). Препарат эффективно ингибировал рост экспериментальных лейкозов, вызывая излечение значительной части мышей с лимфолейкозами. На L1210 и Р388установлена терапевтическая доза ормустина (125 мг/кг) при однократном внутривенном его введении. Выводы Выявленная активность характеризует ормустин как потенциальный противоопухолевый препарат.
32-35 35
Аннотация
Введение. Рак пищевода занимает 6-е место в мире в структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями и характеризуется значительной территориальной вариабельностью заболеваемости. Цель исследования - сравнительное изучение химиопрофилактической активности ликопина в отношении новообразований пищевода, индуцированных у крыс N-метил-N-бензилнитрозамином. Материалы и методы. Исследование проведено на крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 160-180 г. Новообразования пищевода индуцировали введением с питьевой водой N-метил-N-бензилнитрозамина в разовой дозе 0,5 мг/кг массы тела в 10 % растворе этилового спирта ежедневно в течение 8 нед. Результаты. Применение ликопина в дозе 50 мг/кг массы тела приводило к статистически достоверному снижению частоты возникновения новообразований в группе животных, получавших канцероген, со 100 до 44 % (р < 0,05). Количество опухолей на одну особь в группе животных, получавших ликопин, достоверно уменьшилось в 2,4 раза (р < 0,05). Средний балл микроскопических изменений снизился под воздействием ликопина в 2,4раза (р < 0,001) по сравнению с группой животных, получавших канцероген, что свидетельствует о торможении процессов малигнизации неопластических изменений в органе-мишени. Дополнительное введение ликопина экспериментальным животным, получавшим N-метил-N-бензилнитрозамин, препятствовало формированию дисбаланса в системе перекисного окисления липидов - антиоксидантной защиты: снижению активности антиоксидантных ферментов и накоплению основного продукта перекисного окисления липидов малонового диальдегида. Выводы Согласно полученным на данном этапе исследований результатам, каротиноид ликопин обладает антиоксидантной и химиопрофилактической активностью.
36-46 65
Аннотация
Статья посвящена идентификации и количественному определению гинзенозидов в составе мультифитоадаптогенного препарата «Фитомикс-40» (ФМ-40) с компонентами 40растительных экстрактов, включая женьшень. Препарат обладает широким спектром действия, в том числе антимутагенным, противоопухолевым, радио- и нейропротекторным, иммуно-и гормономодулирующим, антиоксидантным эффектами. Цель исследования - определение состава гинзенозидов и их количественного содержания в ФМ-40 с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС). Материалы и методы. В работе исследовали ФМ-40, препарат сравнения, содержащий компоненты тех же экстрактов растений, что и ФМ-40, только в иных (известных) соотношениях, а также экстракт женьшеня. Для определения отдельных гинзенозидов применяли коммерческие стандарты, а также данные литературы. Хроматограммы были получены в коротком (с достижением удовлетворительного разделения веществ) и длинном (более информативном) градиентах подачи мобильной фазы. Результаты. ВЭЖХ-МС/МС с использованием стандартов гинзенозидов и данных литературы была успешно применена для идентификации и количественного определения гинзенозидов. Установлены оптимальные условия их разделения. Полученные в ходе данных исследований хроматограммы и спектры компонентов препарата могут быть использованы в качестве стандартов гинзенозидов. В составе ФМ-40 выявлены гинзенозиды Rb1, Rb, Rc, Rd, Rg1, Rg, Re, Rf, Ro, мало-нил-Rb1, -Rb2/Rb3/Rc и -Rd.
47-54 32
Аннотация
Цель исследования - сравнение эффективности фотодинамического действия триметилового эфира хлорина е6 (ЗМеСЫ) и его производного с остатком галактозы в пирроле А (3MeChl_gal_NoAc), а также сравнительная характеристика накопления этих соединений в опухоли и их биораспределения в нормальных органах и тканях животных. Материалы и методы. Исследования в системе in vitro проводили на опухолевых клетках мышиной карциномы легкого Льюиса (LLC) в мультипараметрической системе. Фотоиндуцированную противоопухолевую активность и биораспределение ЗМеСЫ и 3MeChl_gal_NoAc изучали на мышах BDF1 с LLC. Биораспределение и фармакокинетику оценивали методом локальной флуоресцентной спектроскопии. Облучение проводили на 7-й день роста опухоли светодиодным источником с длиной волны 661 ± 16 нм при варьировании дозы фотосенсибилизаторов от 0,5 до 7,5 мг/кг и интервале времени между введением и облучением от 5 до 120 мин и при плотности энергии 90 Дж/см2. Результаты. В экспериментах на культивируемых клетках мышиной LLC установлено, что 3MeChl_gal_NoAc обладает более высокой фотоиндуцированной цитотоксичностью, чем его незамещенный предшественник: концентрация ФС, при которой наблюдается 50 % ингибирование клеток (ИК50), составила 25 ± 1,5 нмоль и 171 ± 4,0 нмоль соответственно. При внутривенном введении мышам с подкожной LLCуровень нормированной флуоресценции в опухоли достигал максимальных значений для 3МеСЫ(18,4 ± 0,7отн. ед.) в течение 60мин, дляMeChlgalNoAc (34,1 ± 6,9отн. ед.) в течение 15мин. Введение 3MeChl обеспечивало более высокий флуоресцентный контраст опухоли относительно нормальной кожи и мышечной ткани (до 7,4 и 4,1 соответственно), чем введение 3MeChl_gal_NoAc (до 5,0 и 2,5 соответственно). При сходном профиле биораспределения конъюгат 3MeChl_gal_NoAc быстрее, чем 3MeChl, элиминировался из организма мышей-опухолено-сителей. На модели подкожной LLC у мышей при внутривенном введении 3MeChl_gal_NoAc в дозе 5,0 мг/кг и интервале между введением фотосенсибилизатора и началом светового воздействия 5мин (длительность облучения 15мин, доза света 90 Дж/см2) получен высокий противоопухолевый эффект фотодинамической терапии - 100 % излеченных животных. Однако стремительное выведение галактозильного производного из ткани опухоли, низкая избирательность ее фотодинами-ческого повреждения, а также узкий интервал высокоэффективных терапевтических доз значительно ограничивают перспективность применения данной модификации триметилового эфира хлорина е6 для фотодинамической терапии злокачественных опухолей.
55-60 38
Аннотация
Цель исследования - создание стабильной липосомальной лекарственной формы отечественного гидрофобного противоопухолевого соединения из группы производных индолокарбазолов - ЛХС-1208. Материалы и методы. Количественное содержание препарата в липосомах определяли спектрофотометрическим методом с использованием стандартного образца при X = 320 ± 2 нм. Эффективность включения рассчитывали по соотношению концентрации препарата в липосомальной дисперсии после фильтрации через нейлоновые мембранные фильтры «Pall» с порами диаметром 0,22 мкм на экструдере к концентрации ЛХС-1208 в липосомальной дисперсии до фильтрации. Определяли рНлипосом методом потенциометрии. Размер липосом изучали с использованием наносайзера. Цитотоксическую активность изучали в МТТ-тесте. Результаты. Были получены и проанализированы экспериментальные модели составов липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208 с различными молярными соотношениями компонентов. Выбран состав со следующими молярными соотношениями ЛХС-1208: лецитин - 1:150 и лецитин : холестерин : PEG-2000 - 1:0,2:0,003. В данном составе наблюдался максимальный уровень включения ЛХС-1208 (94 %) в липосомы с наиболее приемлемым размером везикул (185 ± 10 нм). Изучена цитоток-сическая активность липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208, концентрация вещества, вызывающая гибель 50 % клеток (ИК5), составила 1,24 мкг/мл. Заключение. В результате проведения комплекса фармацевтических исследований определен оптимальный состав компонентов и разработана технология получения липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208.
61-65 31
Аннотация
Введение. Крапивница - это распространенное заболевание, характеризующееся образованием на коже зудящих волдырей. Крапивницу легко диагностировать, но не всегда просто лечить из-за различной тяжести течения, частой устойчивости к антигистаминным препаратам, выраженного снижения качества жизни пациентов. Цель исследования - ретроспективный анализ историй болезней пациентов, страдающих острой и хронической крапивницей, для выявления наиболее значимых этиологических факторов с целью оптимизации диагностики и лечения. Материалы и методы. Проанализированы данные 307 историй болезней пациентов с различными формами крапивницы, находившихся на лечении в отделении аллергологии в 2008-2014 гг. Диагноз устанавливали на основании результатов общеклинических методов обследования, соответствующих стандартам диагностики заболевания, а также специфического аллергологического исследования. Результаты. Хотя больные с острой и хронической крапивницей проходят обследование и лечение в стационаре по одному медицинскому экономическому стандарту, пациенты с хронической крапивницей требуют более широкого спектра диагностических мероприятий. Соответственно, их обследование является более дорогостоящим. Заключение. Несмотря на широкий спектр возможных причин крапивницы, остается ряд пациентов, у которых провоцирующий фактор не выявлен. Крапивница является полиэтиологичным заболеванием, при котором требуется комплексное обследование пациента.
66-75 79
Аннотация
Введение. В формировании рецидивирующих и/или затяжных хронических воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей помимо известных, изученных ранее факторов, немаловажную роль играют нарушение в иммунной системе человека на уровне местного (мукозального) и системного иммунитета и активация вирусов герпес-группы (вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус, вирус герпеса 6-го типа). В терапии герпесвирусных инфекций для активации противовирусного иммунитета в отечественной медицине используют препараты индукторов интерферонов. Цель исследования - оценить эффективность применения препарата Амиксин® у пациентов с хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями верхних дыхательных путей. Материалы и методы. На базе отделения аллергологии и иммунотерапии Института иммунологии ФМБА проведено исследование низкомолекулярного индуктора интерферона Амиксина® (ОАО «Фармстандарт-Томскхимфарм», Россия) в комплексной терапии хронических рецидивирующих воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей. В исследование были включены 40 пациентов (мужчин и женщин) в возрасте от 18 до 65лет с наличием в анамнезе рецидивирующих хронических воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей. Клинические методы исследования включали сбор анамнеза, данные о ранее проведенном лечении, наличии сопутствующих заболеваний. Лабораторные методы обследования включали бактериологический посев на флору в материале из ротоглотки и детекцию ДНК вирусов герпес-группы в слюне. Пациентам основной группы после проведения клинического и лабораторного обследования назначалась терапия препаратом Амиксин®. Пациенты обеих групп получали симптоматическую терапию. Общая продолжительность наблюдения за каждым пациентом составила 3 мес. Результаты. Прием препарата Амиксин® у пациентов с обострением хронических рецидивирующих воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей способствовал более быстрому купированию общих и местных симптомов. Также установлено, что Амиксин® способствует снижению показателей среднего значения вирусной нагрузки в отношении вируса Эпштейна-Барр. В течение последующих 3 мес наблюдения у 25 % пациентов основной группы отмечены обострения исследуемой патологии верхних дыхательных путей, в контрольной группе доля пациентов с повторными обострениями была больше - 60 %, что свидетельствует о профилактическом действии терапии Амиксином®. Выводы. Применение низкомолекулярного индуктора интерферона Амиксина® (ОАО «Фармстандарт-Томскхимфарм», Россия) в комплексной терапии показало хорошую эффективность в отношении снижения концентрации хронических вирусных инфекций в ротоглотке и профилактики хронических рецидивирующих воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей.
76-81 53
Аннотация
Введение. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ), результаты которой детектируются с помощью проточной цитофлуори-метрии, позволяет идентифицировать клеточные белки, находящиеся либо на поверхности клетки, либо внутри нее в случае использования пермеабилизации. Однако этот метод не дает ответа на вопрос о распределении искомого антигена по клеточным компартментам, в частности о его ассоциации с клеточным ядром. Между тем ядерная локализация изучаемого белка во многом позволяет судить о механизмах его действия. Поэтому разработка протокола выделения интактных клеточных ядер, пригодных для анализа на проточном цитофлуориметре, способна дополнить сведения о расположении и функциональном значении многих ядерноассоциированных протеинов. Цель исследования - разработка метода выделения чистой фракции интактных, стабилизированных клеточных ядер, пригодных для иммунофлуоресцентного анализа на проточном цитофлуориметре. Материалы и методы. В работе изучали ядерную локализацию рецептора фактора роста эндотелия сосудов 1-го типа (VEGF-R1). В качестве объекта исследования использовали линию опухолевых клеток человека A431. Интактность экстрагированных ядер оценивали путем микроскопического исследования окрашенных мазков из ядерной суспензии. Экспрессию рецептора регистрировали с помощью непрямой РИФ на проточном цитофлуориметре. Результаты. Применение разработанного протокола позволило получить суспензию из одиночных неповрежденных клеточных ядер, что является необходимым условием постановки РИФ. На экстрагированных ядрах нам удалось выявить рецептор как на наружной мембране (интактные ядра), так и внутри ядра (пермеабилизованные ядра). Причем внутриядерное содер-жаниерецептора VEGF-R1 превышало таковое на ядерной поверхности в 3,8 раза (17,9 ± 1,04 и 4,8 + 0,26 % соответственно). Заключение. Разработанный нами метод оказался пригодным для идентификации и установления локализации искомых ядерных белков на проточном цитофлуориметре. В сочетании с такими широко применяемыми методиками, как иммуноци-тохимическое исследование, вестерн-блоттинг и др., РИФ на ядрах поможет исследователю сформировать более полное представление о свойствах ядерноассоциированных белков.


ISSN 1726-9784 (Print)
ISSN 1726-9792 (Online)