Возможности метода использования высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией для количественного и качественного определения биологически активных веществ женьшеня в фитоэкстрактах

Статья посвящена идентификации и количественному определению гинзенозидов в составе мультифитоадаптогенного препарата «Фитомикс-40» (ФМ-40) с компонентами 40растительных экстрактов, включая женьшень. Препарат обладает широким спектром действия, в том числе антимутагенным, противоопухолевым, радио- и нейропротекторным, иммуно-и гормономодулирующим, антиоксидантным эффектами. Цель исследования - определение состава гинзенозидов и их количественного содержания в ФМ-40 с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС). Материалы и методы. В работе исследовали ФМ-40, препарат сравнения, содержащий компоненты тех же экстрактов растений, что и ФМ-40, только в иных (известных) соотношениях, а также экстракт женьшеня. Для определения отдельных гинзенозидов применяли коммерческие стандарты, а также данные литературы. Хроматограммы были получены в коротком (с достижением удовлетворительного разделения веществ) и длинном (более информативном) градиентах подачи мобильной фазы. Результаты. ВЭЖХ-МС/МС с использованием стандартов гинзенозидов и данных литературы была успешно применена для идентификации и количественного определения гинзенозидов. Установлены оптимальные условия их разделения. Полученные в ходе данных исследований хроматограммы и спектры компонентов препарата могут быть использованы в качестве стандартов гинзенозидов. В составе ФМ-40 выявлены гинзенозиды Rb₁, Rb, Rc, Rd, Rg₁, Rg, Re, Rf, Ro, мало-нил-Rb₁, -Rb₂/Rb₃/Rc и -Rd.

фитоадаптоген, гинзенозиды, электрораспыление, тандемная масс-спектрометрия, пределы детектирования, phytoadaptogene, ginsenosides, electro spray, tandem mass-spectrometry, limits of detection

1. Бочарова О.А., Барышников А.Ю., Давыдов М.И. Фитоадаптогены в онкологии и геронтологии. М.: МИА. 2008.

2. Бочарова О.А., Давыдов М.И., Барышников А.Ю. и др. Комплексные фито-адаптогены в онкологии и геронтологии. Вестник РАМН 2009;8:21-5.

3. Бочаров Е.В., Кучеряну В. Г., Крыжановский Г.Н. и др. Влияние комплексного фитоадаптогена на МФТП-индуцированный паркинсо-нический синдром у мышей. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2006;141(5):495-8.

4. Бочаров Е.В., Кучеряну В.Г., Бочарова О.А., Карпова Р.В. Нейропро-текторные свойства фитоадаптогенов. Вестник РАМН 2008;4:47-50.

5. Бочаров Е.В., Карпова Р.В., Казеев И.В. и др. Исследование радиозащитной активности мультифитоадаптогена в эксперименте на мышах. Патологическая физиология и экспериментальная терапия 2013;3:55-8.

6. Бочарова О.А., Карпова Р. В., Голубева В.А. и др. Токсикологическое изучение препарата Фитомикс-40. Гигиена и санитария 1999;5:60-1.

7. Бочарова О.А., Чекалина Т.Л., Мезенцева М.В. и др. Перспективы использования Фитомикс-40 для профилактической онкологии. Российский биоте-рапевтический журнал 2002;1(2):114.

8. Бочарова О.А., Лыженкова М. А., Мезенцева М.В. и др. Фитоадаптоген для профилактической онкологии: иммунобиологические критерии состава. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2003;136(12):670-3.

9. Бочарова О.А., Карпова Р. В., Ильенко В.А. и др. Лейкоцитарные инте-грины при гепатоканцерогенезе мышей высокораковой линии СВА. Российский биотерапевтический журнал. 2013;12(3):53-6.

10. Карпова Р.В., Бочаров Е.В., Казеев И.В. и др. Радиозащитная эффективность мультифитоадаптогена в опытах на собаках. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2013;4:51-4.

11. Куренная О.Н., Карпова Р.В., Бочарова О.А. и др. Антимутагенез муль-тифитоадаптогена в клетках дрожжей-сахаромицетов. Генетика. 2013; 49(12):1364-9.

12. Bocharova O.A., Kucheryanu V.G., Kryzhanovsky G.N. et al. Phytomix-40: antiparkinsonian and antioxidant activities. Abstracts of 2nd World Meeting on Pharmaceutics, Biopharmaceutics and Pharmaceutical Technology 1998:1161-2.

13. Бочаров Е.В., Иванова-Смоленская И.А., Полещук В.В. и др. Возможности фито-адаптогена-нейропротектора при лечении нейродегенеративного заболевания (на примере болезни Паркинсона). Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2010;149(6):619-21.

14. Бочарова О.А., Пожарицкая М.М., Чекалина Т.Л., Воронин В.Ф. Современные аспекты патогенеза и лечения лейкоплакии слизистой оболочки полости рта. Методическое руководство для врачей. М.: ВУНМЦ, 2004.

15. Бочарова О.А., Пожарицкая М. М., Чекалина Т.Л. и др. Лейкоплакия слизистой оболочки полости рта: патогенез и возможности коррекции фитоадаптоге-ном. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2004;138(12):652-7.

16. Бочарова О.А., Матвеев В.Б., Карпова Р.В. и др. Коррекция клиниче ских и иммунобиологических показателей у мужчин с доброкачественной гиперплазией предстательной железы фитоадаптогеном. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2006;141(5):555-9.

17. Бочарова О.А., Давыдов М. И., Клименков А.А. и др. Перспективы применения фитоадаптогена в лечении распространенного рака желудка. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2009;148(7):96-9.

18. Бочков Н.П., Бочарова О. А., Аксенов А.А. и др. Частота хромосомных аберраций в лимфоцитах пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы. Медицинская генетика 2005;4(1):15-9.

19. Багирова В.Л., Северцев В.А. Настойки, экстракты и их стандартизация. СПб: СпецЛит, 2001.

20. Бочарова О.А., Куренная О.Н., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б. Новый способ биологического тестирования препаратов адаптогенов. Биотехнология 1993(8):28-34.

21. Бочарова О.А., Лыженкова М. А., Куренная О.Н., Княжев В.А. Способ биологического контроля комплексного фи-тоадаптогена. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2003;136(12):694-9.

22. Бочарова О.А., Барышников А.Ю. Фитоадаптогены в онкологии. М.: ЗооМедВет, 2004.

23. Зенкевич И.Г., Багирова В.Л., Сокольская Т.А., Нечаева Е.Б. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки. Фармация 2002;1:43-5.

24. Бочарова О.А. Композиция ингредиентов для препарата Фитомикс-40. Патент РФ № 2099410, 1998.

25. Шейченко В.И., Бочарова О.А., Шейченко О.П. и др. Аналитические возможности метода ЯМР для определения компонентов препарата Фитомикс-40. Заводская лаборатория. Диагностика материалов 2006;2(8):15-23.

26. Шейченко О.П., Бочарова О.А., Крапивкин Б.А. и др. Определение химического состава летучих соединений фи-тоадаптогена «Фитомикс-40» методом хроматомасс-спектрометрии. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2008;5:18-28.

27. Шейченко О.П., Бочарова О.А., Крапивкин Б.А. и др. Исследование комплексного фитоадаптогена методом ВЭЖХ. Вопросы биологической, меди цинской и фармацевтической химии 2012;10:52-9.

28. Li H., Lee J.H., Ha J.M. Effective purification of ginsenosides from cultured wild ginseng roots, red ginseng and white ginseng with macroporous resins. J Microbiol Biotechnol 2008;18(11):1789-91. PMID: 19047822

29. Liu Z., Li Y., Li X. et al. The effects of dynamic changes of malonyl ginsenosides on evaluation and quality control of Panax ginseng C.A. Meyer. J Pharm Biomed Anal 2012;64-65:56-63. doi: 10.1016/j. jpba. 2012.02.005. Epub 2012 Feb 15. PMID: 22387101

30. Morinaga O., Uto T., Yuan C.S. et al. Evaluation of a new eastern blotting technique for the analysis of ginsenoside Re in American ginseng berry pulp extracts. Fitoterapia 2010;81(4):284-8. doi: 10.1016/j. fitote. 2009.10.005. Epub 2009 Oct 20. PMID: 19850112

31. Wong V.K., Cheung S.S., Li T. et al. Asian ginseng extract inhibits in vitro and in vivo growth of mouse lewis lung carcinoma via modulation of ERK-p53 and NF-kB signaling. J Cell Biochem 2010;111(4):899- 910. doi: 10.1002/jcb. 22778. PMID: 20665661

32. Chen G., Yang M., Song Y. et al. Comparative analysis on microbial and rat metabolism of ginsenoside Rb1 by high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Biomed. Chromatogr. 2008;22(7):779-85. doi: 10.1002/bmc. 1001.

33. Deng G.F., Wang D.L., Meng M.X. et al. Simultaneous determination of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1, Re, Rb1 and icariin in rat plasma by ultraperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed 2009;877(22):2113-22. doi: 10.1016/j. jchromb. 2009.06.003. Epub 2009 Jun 10. PMID: 19541552

34. Li X., Tang M.H., Zhang F. et al. Quantitative determination of ginsenoside Re and Rg1 in human plasma by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban 2009;40(5):912-7. PMID: 19950613

35. Zhao Q., Zheng X., Jiang J. et al. Determination of ginsenoside Rg3 in human plasma and urine by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2010;878(24):2266-73. doi: 10.1016/ j. jchromb. 2010.06.019. Epub 2010 Jun 25. PMID: 20673651