ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОЛИГОСАХАРИДОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ МОДИФИКАЦИИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

Введение. Моноклональные антитела (МКАТ) служат надежным и удобным инструментом диагностики патологий человека. Чаще всего они используются в качестве конъюгатов с флуоресцентными и иными метками. Классический подход создания таких конъюгатов сводится к химическим реакциям с использованием белковой основы моноклональных антител. Вместе с тем для целого ряда МКАТ изготовление конъюгата сопровождается встраиванием метки в антигенсвязывающий участок, что приводит к уменьшению или полной потере специфической активности конъюгата. Выходом из данной ситуации может стать синтез флуоресцентных конъюгатов методами углеводной химии через пространственно удаленные от активного центра олигосахариды антител. Цель исследования - показать принципиальную возможность химической модификации олигосахаридов МКАТ серии ICO и получить на их базе флуоресцентные конъюгаты. Материалы и методы. В работе использовалась панель МКАТ серии ICO высокой степени очистки. Олигосахариды МКАТ, окисляясь до альдегидных групп, подвергались взаимодействию с гидразиновым производным биотина и конъюгировались со стрептавидин-флуоресцеином. Полученный комплекс был использован для прямой реакции иммунофлуоресценции. Результаты. Все модифицированные МКАТ сохраняли специфичность связывания с клетками-мишенями, присущую нативным антителам. Заключение. Данный метод может быть альтернативой для конъюгирования флуоресцентных меток с МКАТ, для которых методы белкового синтеза приводят к потере активности конъюгата.

моноклональные антитела, флуоресцентные конъюгаты, олигосахарид IgG, проточная цитометрия, monoclonal antibody, fluorescent conjugates, oligosaccharide IgG, flow cytometry

1. Buchowicz I., Zakrzewski K. Carbohydrate oxidation and antibody function in equine anti-diphtheria immunoglobulin T. Immunochemistry 1975;12:795-800. PMID: 173648.

2. Hage D.S., Wolfe C.A., Oates M.R. Development of a Kinetic Model To Describe the Effective Rate of Antibody Oxidation by Periodate. Bioconjugate Chem 1997;8(6):914-20. DOI: 10.1021/bc970112o. PMID: 9404666.

3. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques. Amsterdam: Elsevier Academic Press, 2013.

4. Ey P.L., Prowse S.J., Jenkin C.R. Isolation of pure IgG1, IgG2a, and IgG2b immunoglobulins from mouse serum using protein A-sepharose. Immunochemistry 1978;15(7):429-36. PMID: 30693.

5. Голубцова Н.В., Бурова О.С., Барышников К.А. и др. Моноклональные антитела ICO-406 против антигена CD117. Российский онкологический журнал 2015;2:99-104.

6. Temponi M., Kageshita T., Perosa F. et al. Purification of murine IgG monoclonal antibodies by precipitation with caprylic acid: comparison with other methods of purification. Hybridoma 1989;8:85-95. DOI: 10.1089/hyb.1989.8.85. PMID: 2784406.

7. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature 1970;227(5259):680-5. PMID: 5432063.

8. Толчева Е.В., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-от5-иммуно-липосомы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к от5+-клеткам. Российский биотерапевтический журнал 2005;4:38-43.

9. Murata M., Kawamura A.Jr. Effect of molar ratio of fluorescent dye to IgG on the detection of lymphocyte surface immunoglobulins by immunofluorescence. Microbiol Immunol. 1980;24(1):65-78. PMID: 6767174.