ПРОЯВЛЕНИЕ ЦИТОСТАТИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К БЕЛКУ PRAME

Введение. Белок PRAME является перспективной мишенью для противоопухолевой иммунотерапии, так как не экспрессируется в здоровых тканях, но активен в опухолевых клетках многих гистологических типов. Нами были разработаны мышиные моноклональные антитела (МКАТ) 5D3F2 и 6H8F12, распознающие эпитопы белка PRAME. Цель исследования - определение эффектов, оказываемых МКАТ 5D3F2 и 6H8F12 на клетки, экспрессирующие ген PRAME на различных уровнях. Материалы и методы. Использовались линии клеток NOMO-1 и WI-38 с низким уровнем экспрессии PRAME, THP-1 - со средним уровнем экспрессии, К562 и WI-38-PRAME - с высоким уровнем экспрессии PRAME. Проводилось инкубирование данных линий клеток с МКАТ 5D3F2 и 6H8F12. Конечная концентрация МКАТ в культуральной среде составила от 6 до 120мкг/мл. Проводился подсчет клеток после инкубирования МКАТ после 24, 48 и 72 ч эксперимента. Количество мертвых клеток оценивали при проведении МТТ-теста после 24 ч инкубирования клеток с МКАТ 6H8F12. Результаты. Скорость роста клеток замедлилась при инкубировании в присутствии МКАТ. Эффект замедления роста клеток увеличивался напрямую с ростом концентрации МКАТ в среде (коэффициент корреляции Пирсона составил 0,67; p = 0,0219). Рост клеток линии К562 был значимо меньшим, чем линии THP-1 (p = 0,0061), NOMO-1 (p = 0,0005) и WI-38 (p = 0,0002), в присутствии одинакового количества МКАТ 6H8F12. Скорость роста клеток линии К562 была ниже, чем клеток линии WI-38-PRAME (p = 0,0027), несмотря на одинаковый уровень экспрессии гена PRAME. Влияние МКАТ 5D3F2 и 6H8F12 на скорость роста клеток было сопоставимым (p = 0,3946). Согласно данным MTT-теста в линиях K562 и WI-38-PRAME погибало сопоставимое количество клеток после 24 ч инкубирования с МКАТ 5D3F2 и 6H8F12 (p = 0,8405). При тех же условиях погибло меньше клеток линии THP-1, чем K562 (p = 0,6335). По сравнению с K562 в линиях NOMO-1 и WI-38 погибло существенно меньшее количество клеток (p = 0,0026 и p = 0,0005 соответственно). Заключение. Показано, что МКАТ 5D3F2 и 6H8F12 проявляют существенный цитотоксический эффект в отношении клеток, экспрессирующих PRAME. При более высоком уровне экспрессии гена PRAME в клетках цитостатический эффект более сильный.

PRAME, моноклональные антитела, гибель клеток, PRAME, monoclonal antibodies, cell death

1. Мисюрин В.А. Аутосомные раково-тестикулярные гены. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(3):77-82.

2. Голубцова Н.В., Степанова Е.В., Бармашов А.Е. и др. Определение специфических противоопухолевых антител у больных диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии. Российский биотерапевтический журнал 2014;11(3):25-8.

3. Williams J.M., Chen G.C., Zhu L., Rest R. F. Using the yeast two-hybrid system to identify human epithelial cell proteins that bind gonococcal Opa proteins: intracellular gonococci bind pyruvate kinase via their Opa proteins and require host pyruvate for growth. Mol Microbiol 199;27(1):171- 86. PMID: 9466265.

4. Лыжко Н.А., Ахлынина Т.В., Мисюрин A3. и др. Повышение уровня экспрессии гена PRAME в опухолевых клетках сопровождается локализацией белка в клеточном ядре. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(4):19-30.

5. Stevenson G.T. Three major uncertainties in the antibody therapy of cancer. Haematologica 2014;99(10):1538-1546. DOI: 10.3324/haematol. 2013.084640.

6. Bradbury A.R. M., Sidhu S., Dubel S. et al. Beyond natural antibodies: the power of in vitro display technologies. Nature Biotechnology 2011;29:245-54. DOI: 10.1038/nbt. 1791.

7. Trauth B.C., Klas C., Peters A.M. et al. Monoclonal antibody-mediated tumor re gression by induction of apoptosis. Science 1989;245(4915):301-5. PMID: 2787530.

8. Yonehara S., Ishii A., Yonehara M. A cell-killing monoclonal antibody (anti-Fas) to a cell surface antigen co-downregulated with the receptor of tumor necrosis factor. J Exp Med 1989;169(5):1747-56. PMID: 2469768.

9. Dobson C.L., Main S., Newton P. et al. Human monomeric antibody fragments to TRAIL-R1 and TRAIL-R2 that display potent in vitro agonism. MAbs 2009;1:552- 62. PMID: 20068388.

10. Maegawa M., Takeuchi K., Funakoshi E. et al. Growth stimulation of non-small cell lung cancer cell lines by antibody against epidermal growth factor receptor promoting formation of ErbB2/ ErbB3 heterodimers. Mol Cancer Res 2007;5(4):393-401. DOI: 10.1158/1541 - 7786. MCR-06-0303. PMID: 17426253.

11. Wadelin F.R., Fulton J., Collins H.M. et al. PRAME is a golgi-targeted protein that associates with the Elongin BC complex and is upregulated by interferon-gamma and bacterial PAMPs. PLoS One 2013;8(2):e58052. PMID: 23460923.

12. Costessi A., Mahrour N., Ti-jchon E. The tumour antigen PRAME is a subunit of a Cul2 ubiquitin ligase and associates with active NFY promoters. EMBO J 2011;30(18):3786-98. DOI: 10.1038/ emboj.2011.262. PMID: 21822215.

13. De Carvalho D.D., Mello B.P, Pereira W.O., Amarante-Mendes G.P. PRAME/EZH2-mediated regulation of TRAIL: a new target for cancer therapy. Curr Mol Med 2013;13(2):296-304. PMID: 23228130.

14. Мисюрин В.А., Лукина А.Е., Мисюрин А.В. и др. Особенности соотношения уровней экспрессии генов PRAME и PML/RARa в дебюте острого промиелоцитарного лейкоза. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(1):9-16.

15. Xu Y., Rong L.-J., Meng S.-L. et al. PRAME promotes in vitro leukemia cells death by regulating S100A4/p53 signaling. European Review for Medical and Pharmacological Sciences 2016;20:1057-63. PMID: 27049257.

16. Huang Q., Li L., Lin Z. et al. Identification of Preferentially Expressed Antigen of Melanoma as a Potential Tumor Suppressor in Lung Adenocarcinoma. Med Sci Monit 2016;22:1837-42. PMID: 27241212.

17. Ахлынина Т.В., Мисюрин А.В., Лыжко Н.А. и др. Наличие иммуногенного антигена в опухолевой клетке способствует антипролиферативному действию дендритных клеток. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(4):23-30.

18. Kawasaki T., Taro K. Toll-Like Receptor Signaling Pathways. Front Immunol 2014;5(461). DOI: 10.3389/fimmu. 2014.00461.