Mоделирование подкожного ксенографта меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF на иммунодефицитных мышах для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств

Введение. Разработка новых моделей диссеминированной меланомы кожи человека с молекулярно-генетической мишенью для таргетной терапии повышает результативность доклинических исследований in vitro и in vivo новых антимеланомных средств и их комбинаций. Такая возможность реализована путем адаптации к росту in vivo оригинальной линии клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher и получения подкожного (п/к) ксенографта под контролем трансплантационных, морфологических, молекулярно-генетических (мутация V600E BRAF) и химиотерапевтических (чувствительность к ингибитору BRAF-киназ вемурафенибу) характеристик. Цель исследования - получение из линии клеток mel Cher п/к ксенографта пигментированной меланомы кожи человека с мутацией V600E BRAF, чувствительной к специфической таргетной терапии. Материалы и методы. Использованы линия клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher из коллекции ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (РОНЦ) и иммунодефицитные мыши-самки Balb/c nude разведения РОНЦ. Искомые характеристики определены при многократном п/к трансплантировании in vivo с помощью методов трансплантационной биологии, световой микроскопии, молекулярной генетики и экспериментальной химиотерапии. Чувствительность к ингибитору BRAF-киназы вемурафенибу оценена под контролем скорости роста опухоли (V/Vq) по адекватным для пациентов показателям: наличие полной ремиссии и возможность рецидива. Результаты. При п/к трансплантации 10⁷ клеток линии mel Cher получены цитологически идентичные перевиваемые п/к ксенографты с устойчивой кинетикой роста на 4-9-м пассажах (латентная фаза 8 дней, экспоненциальная - до 14, стационарная - до 24) и наличием мутации V600E BRAF. Вемурафениб в разовой дозе 75 мг/кг вызвал полную ремиссию в течение 15-дневного курса и в течение 7 дней после его отмены, с последующим рецидивом. Заключение. Полученный из линии клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher чувствительный к вемурафенибу п/к ксенографт с мутацией V600E BRAF пригоден для доклинического изучения направленных на эту мишень новых противомеланомных средств.

пигментированная меланома кожи человека, мутация V600E BRAF, подкожный ксенографт, иммунодефицитная мышь, human pigmented skin melanoma, V600E BRAF mutation, subcutaneous xenograft, immunodeficient mice

1. Вишневская Я.В., Машенкина Я.А., Сендерович А.И. и др. Озвременная морфологическая, иммуногистохимическая и молекулярно-генетическая диагностика меланомы кожи. Сибирский онкологический журнал 2012;4(52): 74-5.

2. Демидов Л.В., Орлова К.В. Индивидуализация лекарственного лечения меланомы кожи. Практическая онкология 2013;14(4):239-46.

3. Bollag G., Hirth P., Tsai J. et al. Clinical efficacy of a RAF inhibitor needs broad target blockade in BRAF-mutant melanoma. Nature 2010;467:596-9.

4. Flaherty K.T., Puzanov I., Kim K.B. et al. Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma. N Engl J Med 2010;363:809-19.

5. Joseph E.W., Pratilas C.A., Poulikakos P.I. et al. The RAF inhibitor PLX4032 inhibits ERK signaling and tumor cell proliferation in a V600E BRAF-selective manner. Proc Natl Acad Sci U S A 2010;107(33):14903-8.

6. Tsai J., Lee J.T., Wang W. et al. Discovery of a selective inhibitor of oncogenic B-Raf kinase with potent antimelanoma activity. Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105:3041-6.

7. Benlloch S., Paya A., Alenda C. et al. Detection of BRAF V600E mutation in colorectal cancer comparison of automatic sequencing and real-time chemistry methodology. J Mol Diagn 2006;8:540-3.

8. Ribas A., Kim K.B., Schuchter L.M. et al. BRIM-2: an open label, multicenter phase II study of vemurafenib in previously treated patients with BRAF V600E mutation positive melanoma. J Clin Oncol 2011; 29(15 Suppl):8509.

9. Walker G.J., Soyer H.P., Terzian T., Box N.F. Modelling melanoma in mice. Pigment Cell Melanoma Res 2011;24:1158-76.

10. Михайлова И.М., Барышников А.Ю. Коллекция клеточных линий меланомы человека. Издательство НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России 2016:107.

11. Патент РФ № 2364624. Клеточная линия меланомы человека mel Cher, используемая для получения противоопухолевых вакцин. Михайлова И.Н., Барышников А.Ю., Демидов Л.В., Киселев С.Л., Бурова О.С., Морозова Л.Ф. 2009.

12. Трещалина Е.М. Иммунодефицитные мыши разведения РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Возможности использования. М., 2010.

13. Патент РФ № 2572569. Способ получения подкожных ксенографтов клеточной линии меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств. 2015.

14. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Гарин А.М. Доклиническое изучение противоопухолевых препаратов. В кн.: Рациональная фармакотерапия в онко логии. М.: Litterra, 2015. С. 75-82.