КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ БЕЛКА BRCA1 В ТКАНИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ

Введение. Нарушение функционирования BRCA1 приводит к развитию ряда онкологических заболеваний, включая рак молочной железы (РМЖ), рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы. Недавно продемонстрирована прогностическая и предиктивная значимость BRCA1, белка репарации ДНК ERCC1 в плане характера течения заболевания и чувствительности/резистентности к химиотерапии, но заключения неоднозначны. Цель исследования - уточнение возможной прогностической значимости экспрессии в опухоли BRCA1 путем проведения строго количественной оценки уровня маркера в ткани РМЖ у пациентов c благоприятным и неблагоприятным прогнозом в соответствии со статусом рецепторов эстрогенов (РЭ) в опухолях, различающихся по чувствительности к препаратам платины. Материалы и методы. Оценка экспрессии BRCA1 проведена в 50 хирургических образцах РМЖ (40 - с положительным статусом РЭ и 10 - с отрицательным) с использованием количественного иммунофлуоресцентного метода, сопряженного с проточной цитофлуориметрией. Суспензии клеток опухоли инкубировали с первичными антителами к BRCA1 (SD118, Calbiochem) и со вторичными флуоресцентными антителами (DyLight650, ab98729, Abcam). Измерение флуоресценции проводили на проточном цитофлуориметре FACSCanto II (Becton Dickinson, США) с применением программного обеспечения FACSDiva 6.0. Показатели экспрессии BRCA1 анализировали с помощью программы FlowJo 10.0 с использованием статистического метода Колмогорова - Смирнова. Уровень экспрессии BRCA1 определяли как количество специфически флуоресцирующих клеток относительно общего количества исследованных. Результаты. Экспрессия BRCA1 идентифицирована во всех исследованных образцах ткани РМЖ со средним значением уровня экспрессии 36,8 ± 7,6 % и медианой 37 %. При расчете t-критерия Стьюдента отмечено статистически значимое различие средних значений уровня экспрессии BRCA1 (р = 0,02) в группах больных с положительным и больных с отрицательным статусом РЭ (38,0 ± 7,5 и 32,0 ± 6,3 % соответственно). Сравнение уровня экспрессии BRCA1 с использованием теста Манна - Уитни также выявило статистически значимое различие (р = 0,016). Различия в средних значениях уровня экспрессии BRCA1 оказались особенно выраженными (р = 0,007) при сравнении групп пациентов с положительным и с отрицательным статусом РЭ со значениями экспрессии BRCA1 меньше медианы (32,4 ± 5,0 и 26,8 ± 2,9 % соответственно). При сравнении показателей экспрессии BRCA1 в опухолях с негативным статусом РЭ и медианы уровня экспрессии BRCA1 по всей группе исследованных опухолей (37 %) выявлена корреляция сниженного уровня экспрессии BRCA1 с отрицательным статусом РЭ в опухоли. Значения уровня экспрессии белка BRCA1 ниже медианы выявлены у 80 % пациентов с отрицательным статусом РЭ в опухоли, выше медианы - в 20 % случаев соответственно. Выводы. Результаты исследований показали, что белок BRCA1 экспрессируется на различном уровне в опухолевой ткани у всех пациентов с РМЖ. Пониженный уровень экспрессии BRCA1 выявляется чаще в РЭ-негативных по сравнению с РЭ-позитивными опухолями, а отсутствие РЭ в ткани РМЖ является неблагоприятным фактором прогноза, соответственно пониженный уровень экспрессии BRCA1 имеет неблагоприятное прогностическое значение.

BRCA1, рецепторы эстрогенов, рак молочной железы, проточная цитофлуориметрия, прогноз, BRCA1, estrogen receptors, breast cancer, flow cytometry, prognosis

1. Clark S., Rodriguez A.M., Snyder R.R. et al. Structure-function of the tumor suppressor BRCA1. Comput Struct Biotechnol J 2012;1(1).pii:e201204005. PMID: 22737296. PMCID: PMC3380633.

2. Mullan P.B., Gorski J.J., Harkin D.P. BRCA1 - a good predictive marker of drug sensitivity in breast cancer treatment? Biochim Biophys Acta 2006 Dec;1766(2):205-16. Epub 2006 Jul 12. PMID: 16919882.

3. Quinn J.E., James C.R., Stewart G.E. et al. BRCA1 mRNA expression levels pre dict for overall survival in ovarian cancer after chemotherapy. Clin Cancer Res 2007;13 (24):7413-20. PMID:18094425.

4. Silver D.P., Richardson A. L., Eklund A.C. et al. Efficacy of neoadjuvant cisplatin in triple-negative breast cancer. J Clin Oncol 2010 Mar 1;28(7):1145-53. DOI: 10.1200/JCO. 2009.22.4725. Epub 2010 Jan 25. PMID: 20100965. PMCID: PMC2834466.

5. Weberpals J.I., Tu D., Squire J.A. et. al. Breast cancer 1 (BRCA1) protein expression as a prognostic marker in sporadic epithelial ovarian carcinoma: an NCIC CTG OV. 16 correlative study. Ann Oncol 2011 Nov;22(11):2403-10. DOI: 10.1093/annonc/mdq770. Epub 2011 Mar 2. PMID: 21368065.

6. Богуш Т.А., Шатурова А.С., Дудко Е.А. и др. Количественная иммунофлуоресцентная оценка с использованием проточной цитофлуориметрии экспрессии эстрогеновых рецепторов ß в солидных опухолях человека. Вестник Московского университета, сер. 2. Химия 2011; 52(4):305-12.