Целью данной работы стало изучение экспрессии антигенов, ассоциированных со стволовыми опухолевыми клетками, на перевиваемых клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина». В реакции прямой иммунофлуоресценции с помощью МКА была изучена экспрессия антигенов CD133, CD117, CD90, CD34, CD44 и CD24, ассоциированных с СОК. В качестве отрицательного контроля использовали изоспецифические антитела, с которыми показатели флюоресценции не превышали 0,5% антиген-положительных клеток. Экспрессия антигенов, ассоциированных с СОК, была гетерогенна. Если принять за дискриминационный уровень 10% антиген-положительных клеток, то экспрессия CD 133 и СЭ117наблюдалась на 6 (28,5%), CD90 - на 12 (57%), CD 34 - на 4 (19%), CD 44 - на 17 (81%) и CD 24 - на 5 (23,8%) из 21 линии. На других линиях клеток экспрессия этих антигенов составила менее 10% (1+8,5%). При клонировании в полужидком агаре клеток линии mel Ibr, экспрессирующих на своей поверхности 8,5% антигена CD133, был получен клон клеток, экспрессирующих 100% CD133⁺. Таким образом, опухолевые клетки, экспрессирующие небольшой процент СОК-ассоциированных антигенов, также являются СОК, а остальные антиген-отрицательные клетки - их потомками.

Ранее было показано, что араноза в лекарственной форме "Лиофилизат для приготовления раствора для инъекций" (араноза-лио) вызывает клеточную смерть за счет активации апоптоза через CD95-рецептоp в отличие от ее липосомальной лекарственной формы, механизм действия которой пока не изучен. Известно, что гибель опухолевых клеток под воздействием противоопухолевых препаратов может также проходить через активацию аутофагии. Цель данной работы - определить влияние липосомальной лекарственной формы аранозы на аутофагию. Исследование проводили на клеточных линиях меланомы человека mel Mtp, mel Ibr, mel Kor, mel Z и mel Mtp clone X. Клетки инкубировали в течение 24 ч с аранозой-лио, либо с липосомальной аранозой в концентрации 450 мкг/мл, после чего проводили анализ экспрессии мРНК гена Beclin 1. В результате на большинстве клеточных линий показано снижение экспрессии мРНК Beclin 1. Это может быть связано с тем, что липосомальная форма препарата вызывает гибель клеток по механизму внутреннего апоптоза, который подавляет аутофагию.

РТА представляют собой группу опухоле-ассоциированных белков, экспрессия которых в норме ограничена только репродуктивными тканями взрослого человека и эмбриональными тканями. В других тканях РТА отсутствуют. При злокачественной трансформации наблюдается аберрантная гиперэкспрессия РТА и их генов. В работе определяли мРНК 20 наименований РТА в образцах опухоли и периферической крови 98 больных колоректальным раком. Среди них мРНК шести наименований генов семейства MAGEA - MAGE-A1, MAGE-A2 MAGE-A3 MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6 - определяемых одновременно с помощью метода, позволяющего выявлять общую для всех шести генов нуклеотидную последовательность мРНК; мРНК восьми генов семейства GAGE (GAGE1-8), также одновременно определяемых по общей для всех нуклеотидной последовательности, мРНК трех генов семейства SSX (SSX1, SSX2, SSX4), мРНК генов XAGE1, NY-ESO1 и мРНК гена MAGEC1. Обнаружено, что выявление мРНК раково-тестикулярных генов можно использовать в качестве мониторинговых тестов. Наличие в крови больного колоректальным раком мРНК генов MAGE-C1 и XAGE1 может быть потенциальным маркером более благоприятного течения заболевания. В то же время, мРНК MAGE-A1-6, GAGE1-8 и SSX1; 2; 4 генов могут свидетельствовать о неблагоприятном прогнозе.

Резистентность мультиформных глиобластом требует создания новых подходов для терапии опухолей головного мозга. Белок Р53 - один из главных клеточных онкогенов, чья экспрессия увеличена в 50% клеток глиобластом. Эффект ингибитора Р53 был изучен в присутствии онколитического аденовируса, и темодала, демонстрирующих противоопухолевый эффект на глиобластомных моделях. В клетках U87 глиобластомы человека мы обнаружили аддитивный эффект между ингибированием Р53, активностью аденовирусного вектора и противоопухолевой активностью алкилирующег о химиопрепарата темодал, выражающийся в увеличенной опухолевой токсичности. Оказалось, что ингибирование Р53 химическим реагентом PFTa вызывает активацию аутофагии, одного из вариантов клеточной смерти. Таким образом, данная терапевтическая комбинация может представлять один из возможных способов увеличения противоопухолевого эффекта онколитического вируса.

Получение фармакологических белков из белка яйца трансгенной птицы представляет собой довольно сложную и дорогостоящую технологию, в одну из основных задач которой входит создание экспрессирующего вектора. Целью исследований являлось получение и оценка временной экспрессирующей системы на основе первичной культуры трансфецированных экзогенной ДНК эпителиальных клеток куриного яйцевода. Было изучено три способа выделения клеток яйцевода кур, при этом только при получении клеток методом инкубации фрагмента яйцевода курицы в растворе Трипсина-Версена при 38 °С, при механическом удалении верхнего слоя клеток с его внутренней поверхности удалось получить гомогенную, стабильную первичную культуру, способную к многократным пассажам. Через 2-3 суток монослой пассировали и еще через 1-2 суток уже использовали для трансфекции. Получение культуры не требовало поэтапной или комплексной обработки яйцевода ферментами, дополнительного оборудования и реактивов для удаления стромальных клеток. Культура клеток яйцевода была успешно трансфецирована с помощью генной конструкции на основе вектора pIRES EGFP2 (фирма Clontech, США) и препарата липосом «Lipofectamin® 2000», при этом число экспрессирующих белок GFP эпителиальных клеток яйцевода составил 5-8 % от общего числа трансфецированных клеток. С помощью разработанной временной экспрессирующией системы в течение 4-5 суток в условиях in vitro было проведено тестирование экспрессии экзогенного гена.

Разработана иммунолипосомальная конструкция митоксантрона, направленная против CD5+ Т-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Для получения иммунолипосомальной конструкции митоксантрона за основу взяли липосомальную модель, в которой липидное соотношение ФХ: ХОЛ: mPEG₂₀₀₀-DSPE: pNP-PEG₃₀₀₀-lipid составило 11: 9: 0,95: 0,05. Очистку иммунолипосомальной конструкции митоксантрона от «свободного» митоксантрона и не связавшихся моноклональных антител проводили методом гельфильтрации. В среднем на одну липосому приходилось ~16 молекул конъюгированных антител. Иммунолипо-сомы связывались с 88 % антиген+ клеток. В МТТ-тесте показали, что иммунолипосомы, нагруженные митоксантроном, убивают антиген клетки-мишени.

В работе оценены физико-химические и биологические свойства гликозилированных производных пирофеофорбида α и хлорина е₆, циклоимидных производных хлорина р₆. Гликозилированные производные пирофеофорбида α и хлорина е₆ характеризовались стабильностью в растворах без воздействия светом, но при облучении подвергались фотовыцветанию. В биологических тестах производные пирофеофорбида а проявляли высокую фотоиндуцированную активность, величина ИК₅₀ варьировалась от 35±7нМ до 82±7 нМ (в зависимости от бокового заместителя и культуры опухолевых клеток). Среди производных хлорина е₆ наибольшую активность проявил конъюгат с галак-тозным остатком в пирроле А в отношении клеток культуры НЕр2, А549 и НТ29 (ИК_{50 -} 15±8 нМ, 70±19 нм и 34±16 нМ, соответственно), активность которого превышала в 8-10 раз неконъюгированный аналог и производные с другой модификацией в макроцикле. Циклоимидные производные хлорина р₆ стабильны в растворе без облучения и относительно устойчивы при воздействии светом. В биологических тестах эти соединения проявляли высокую фотоиндуцированную активность (ИК₅₀ варьировала от 35±10нМ до 250±30 нМ), которая в значительной степени превышала активность немодифицированных производных хлорина р₆.

В эксперименте на модели опухоли саркома М-1 изучена эффективность внутрибрюшинного введения амидоаминхлорина как фотосенсибилизатора при проведении ФДТ. Цель исследования - определить параметры минимально эффективной дозы ФС и лазерного излучения при ФДТ для достижения полной регрессии опухоли. Изучали динамику накопления фотосенсибилизатора в опухоли и здоровой ткани для определения времени проведения ФДТ и противоопухолевую эффективность при разных дозах ФС и различных параметрах лазерного излучения. В результате проведенного исследования был определен оптимальный срок проведения ФДТ и установлена минимально эффективная доза ФС и параметры лазерного излучения.

Проанализирован механизм индукции гибели клеток липосомальными противоопухолевыми препаратами. Липосомальные лекарственные формы доксорубицина, цисплатина и аранозы преодолевают лекарственную устойчивость. Однако механизм преодоления лекарственной устойчивости у этих препаратов разный. Липосомаль-ный доксорубицин преодолевает множественную лекарственную устойчивость посредством связывания липосом с Р-гликопротеином в 185 позиции глицина. Липосомальный цисплатин преодолевает монорезистентность активацией генов внешнего апоптоза. Липосомальная араноза не использует CD95/Fas сигнальный путь апоптоза. Таким образом, механизм действия липосомального препарата зависит от типа клеток, от самого противоопухолевого препарата, заключенного в липосому, и может быть индивидуален в каждом конкретном случая.