Введение. Многопараметрический сравнительный анализ клинических и молекулярно-генетических биомаркеров злокачественных новообразований обладает мощным диагностическим и прогностическим потенциалом и является необходимой предпосылкой для развития персонализированной медицины. Данный подход позволяет не только одновременно выявить экспрессию определенных биомаркеров опухоли, но и получить данные об их пространственном распределении в исследуемых тканях, а также оценить взаимное расположение клеток опухоли и ее микроокружения, экспрессирующих те или иные биомаркеры. Таким образом, многопараметрический иммуногистохимический анализ, позволяющий не только подтвердить наличие определенной нозологии, но и провести 3D-визуализацию биоптатов, изучить пространственную организацию опухолевой ткани и уровни экспрессии биомаркеров на уровне единичных клеток, может открыть широкие перспективы в диагностике и лечении онкологических заболеваний.

Цель исследования – систематизировать данные о возможностях многопараметрического иммуногистохимического анализа для диагностики и развития персонализированного подхода к терапии онкологических заболеваний.

Результаты. Многопараметрический иммуногистохимический анализ дает возможность оценивать гетерогенность опухолей на уровне молекулярных подтипов, а также гетерогенность опухолевого микроокружения, таким образом позволяет прогнозировать развитие опухоли, определить ее метастатический потенциал, а также выбрать эффективную стратегию для подбора индивидуальной терапии.

Заключение. В настоящем обзоре проанализированы результаты использования многопараметрического иммуногистохимического анализа для детекции онкологических заболеваний, показан высокий потенциал этого метода для дифференциации онкологических нозологий и исследования микроокружения опухолей, что позволяет эффективно выбрать терапевтическую стратегию и оценить ответ опухоли на терапию.

Введение. Ранняя чувствительная и высокоспецифичная диагностика является одной из важных составляющих успешной терапии онкологических заболеваний. Флуоресцентные гидрогели позволяют создавать универсальные биосенсоры благодаря повышенной емкости связывания биологических распознающих и репортерных молекул, возможности проведения высокочувствительной флуоресцентной детекции, а также гибкости комбинирования их структурных и функциональных элементов.

Цель исследования – рассмотреть принципы дизайна и методические подходы к созданию биосенсоров на основе флуоресцентных гидрогелей для детекции онкомаркеров, а также обобщить и систематизировать данные по применяемым в них принципам детекции и генерации детектируемого сигнала.

Результаты. Флуоресцентные гидрогели являются примером трехмерных сенсорных платформ – структур, объединяющих репортерную флуоресцентную функцию с биологическими распознающими молекулами, которые позволяют сохранить уникальные оптические свойства флуоресцентных нанокристаллов на макроуровне. Пористая структура гидрогелей позволяет увеличить активную площадь поверхности биосенсоров для трехмерной иммобилизации флуоресцентных меток и биологических распознающих молекул, при этом сохраняя структуру последних для специфического связывания детектируемых молекул образца, что обеспечивает чувствительность, превосходящую традиционные методы иммуноферментного и иммунохроматографического анализа. В качестве биологических распознающих молекул могут выступать не только традиционно применяемые антитела, но и ферменты и гликопротеины, аптамеры и олигонуклеотиды, а также полимеры, полученные методом молекулярного импринтинга, что расширяет круг специфически детектируемых аналитов.

Заключение. В обзоре представлены примеры биосенсоров на основе флуоресцентных гидрогелей для детекции маркеров онкологических заболеваний, изложены подходы к получению этих гелей, иммобилизации биологических распознающих молекул и принципы генерации оптического детектируемого сигнала. Показаны основные преимущества флуоресцентных гидрогелевых биосенсоров перед классическими тестами, применяемыми в области экспресс-диагностики онкологических заболеваний.

Диагностика вторичных миелоидных неоплазий (миелоидных неоплазий, связанных с предшествующей терапией), ассоциированных с лечением солидных опухолей, в большинстве случаев не связана с существенными трудностями. Проблему составляет диагностика вторичных миелодиспластических синдромов после лечения острых миелоидных лейкозов. Сложность ранней диагностики вторичных миелодиспластических синдромов обусловлена разграничением этой нозологии и раннего рецидива предшествующего острого миелоидного лейкоза и, как следствие, трудностями прогноза и стратификации риска для выбора лечения. Актуальность этой проблемы объясняется редкими описаниями подобных наблюдений. Диагностика вторичного миелодиспластического синдрома, по нашему мнению, может быть основана на отсутствии клональной связи опухолевого клона при молекулярном исследовании с 1-м (предшествующим) заболеванием. В настоящей публикации мы приводим первое отечественное описание клинического случая миелодиспластического синдрома, диагностированного после химиотерапии острого миелоидного лейкоза, основываясь на различиях в цитоморфологии, иммунофенотипировании и молекулярном исследовании. Мы трактовали прогноз как благоприятный и назначили соответствующее лечение.

Введение. Интерлейкин 10 (ИЛ-10) является плейотропным цитокином, обладает иммуномодулирующими свойствами и может ингибировать развитие и прогрессирование опухоли или стимулировать ее рост.

Цель исследования – анализ изменений уровня мРНК ИЛ-10 в периферической крови (ПК) больных раком (РПЖ) и доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) в сопоставлении с клинико-лабораторными данными.

Материалы и методы. Под наблюдением находились 63 больных с гистологически подтвержденным РПЖ и 52 больных с гистологически подтвержденной ДГПЖ. Контрольную группу составили 30 практически здоровых лиц, сопоставимых по возрасту. Определение относительного уровня мРНК ИЛ-10 в образцах ПК проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией.

Результаты. Как у больных РПЖ, так и у больных ДГПЖ в ПК наблюдалось статистически значимое снижение уровня мРНК ИЛ-10 по сравнению с группой контроля. При РПЖ самые низкие уровни выявлены у пациентов с концентрацией простатспецифического антигена выше 10 нг / л и при объеме простаты более 50 см3. Различия в уровне мРНК ИЛ-10 на Т2и Т3-стадиях и при разной концентрации тестостерона не имели статистической значимости, хотя наблюдалась выраженная тенденция к понижению при прогностически неблагоприятных случаях. У больных ДГПЖ относительный уровень мРНК ИЛ-10 был статистически значимо выше, чем у больных РПЖ. При концентрации простатспецифического антигена выше 10 нг / мл уровень мРНК ИЛ-10 был ниже, чем при его меньших концентрациях.

Заключение. У больных РПЖ и ДГПЖ в ПК обнаружен сниженный уровень мРНК ИЛ-10. Снижение более выражено при неблагоприятном течении заболеваний и, видимо, является следствием нестабильности мРНК ИЛ-10 на посттранскрипционном уровне.

Введение. Экспериментальные модели псориаза на животных помогли выяснить функции воспалительных медиаторов, раскрыть вклад врожденных или адаптивных иммунных механизмов, кератиноцитов в развитие и поддержание воспаления при псориазе.

Цель исследования – изучить субпопуляционный состав иммунных клеток крови, кожи, лимфоидных органов и сравнить 2 метода изоляции клеток из кожи.

Материалы и методы. В исследование включены 46 мышей линии C57BL / 6, которые разделены на 2 группы: опытную (n = 24) для воспроизведения модели острого псориазоподобного дерматита с помощью имихимод-крема 5 % (62,5 мг / см2 / сут / мышь, 7 дней) и контрольную (n = 22). Оценку тяжести воспаления кожи осуществляли по балльной шкале. На 7-й день исследовали кожу, селезенку, лимфатические узлы (ЛУ), тимус мышей. Для изоляции клеток из кожи применяли метод спонтанной миграции и ферментативной диссоциации с помощью коллагеназы. Оценку субпопуляционной структуры мононуклеарных клеток проводили методом проточной цитометрии с применением моноклональных антител против соответствующих антигенов (СD3, CD4, CD8, CD5, MHC II класса, γδ-TCR, CD38, CD80, CD83, CD86, TLR2). Статистическая обработка проведена при помощи программного пакета winMDI 2.8.

Результаты. Показано, что для иммунофенотипирования γδ-Т-лимфоцитов, дендритных клеток CD86⁺, CD83⁺, CD83⁺CD86⁺ применимы оба метода изоляции клеток кожи. Выявлено снижение экспрессии TLR2 на клетках крови и повышение на клетках ЛУ и кожи. В ЛУ, тимусе отмечено выраженное повышение числа CD38⁺, повышение γδ-Т-лимфоцитов – в ЛУ и крови. В коже показана инфильтрация γδ-Т-лимфоцитами, CD8⁺- и CD38⁺-клетками.

Заключение. Острое псориазоподобное воспаление у мышей сопровождалось повышением количества γδ-Тклеток в крови, ЛУ и коже. Наблюдалась инфильтрация кожи CD8⁺- и CD38⁺-клетками. Оба метода изоляции клеток – метод спонтанной миграции и метод ферментативной диссоциации – оказались применимы для дальнейшего иммунофенотипирования.

Введение. Пневмолизин (Ply) – гемолитический токсин Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae), экспрессируемый всеми штаммами пневмококка. Для его качественного и количественного определения в биологических жидкостях простым, быстрым и эффективным способом может быть использование сэндвич-ИФА (иммуноферментного анализа).

Цель исследования – разработать и оценить специфичность сэндвич-ИФА тест-системы для качественного и количественного определения рекомбинантного Ply (rPly) S. pneumoniae.

Материалы и методы. В качестве распознающих антител в сэндвич-ИФА использовали кроличьи поликлональные антитела (ПкАТ) к rPly, иммобилизованные на твердой фазе. К ПкАТ (rPly) прибавляли исследуемые антигены (АГ). Реакцию проявляли детектирующими мышиными моноклональными иммуноглобулинами – IgG1 (rPly) – антителами, конъюгированными с пероксидазой корня хрена. Специфичность тест-системы оценивали при использовании в качестве референс-препаратов рекомбинантного α-гемолизина (rα-Hly) и водорастворимых АГ Staphylococcus aureus (S. aureus).

Результаты. С помощью сэндвич-ИФА rPly выявлен в концентрации 0,15 мкг / мл. Тест-система характеризовалась специфичностью, что подтверждено отсутствием реакции с rα-Hly S. aureus. Референс-препараты водорастворимых поверхностных АГ штаммов S. aureus № 209, 1986, 1991 и Cowan I давали ложноположительную реакцию за счет присутствия в их составе протеина А (SpA) – термостабильного поверхностного белка, экспрессируемого многими штаммами стафилококка, способного связывать иммуноглобулины через Fc-фрагмент или Fabфрагменты V3H домена В-клеточного рецептора. Отрицательная реакция получена с АГ из штамма S. aureus wood 46, не имеющего гена spa, кодирующего экспрессию SpA. Присутствие SpA в препаратах водорастворимых АГ S. aureus подтверждено в реакции ингибирования при ИФА.

Заключение. Разработан сэндвич-ИФА для качественного и количественного определения Ply S. pneumoniae. Проведенные исследования подтвердили специфичность тест-системы.

Введение. Повышение растворимости новых фармакологически активных субстанций – одна из главных задач фармации. Эта задача становится еще более актуальной в области создания лекарственных форм для труднорастворимых веществ с новым механизмом действия, как в случае с производными 3-гидроксихиназолина, показавшими в опытах in vitro способность активировать гибель опухолевых клеток по типу ферроптоза. К таковым относится и OVF-009 – оригинальная отечественная субстанция. В связи с высокой липофильностью данного соединения предложена технология его солюбилизации с применением модифицированного касторового масла (Kolliphor® ELP, BASF, Германия), разрешенного для парентерального применения.

Цель исследования – создать модель лекарственной формы для нового гидрофобного производного хиназолина с целью оценки в дальнейшем спектра его противоопухолевой активности в опытах in vivo.

Материалы и методы. Субстанция OVF-009, Kolliphor® ELP, этанол 95 %, Kollidon 17 PF (BASF, Германия), гидроксид натрия, фосфатный буфер, вода для инъекций; спонтанное мицеллообразование, ультразвук, потенциометрия, динамическое светорассеяние, электрофоретический метод, метод вискозиметрии и др.

Результаты. В ходе проведения работы рассмотрены основные свойства мицеллообразующего солюбилизатора Kolliphor® ELP и его водных растворов; получены 10 модельных растворов OVF-009 на основе только Kolliphor® ELP и с добавлением этанола и Kollidon 17PF в различных концентрациях; качество полученных составов оценено по параметрам внешнего вида, прозрачности раствора, рН, стабильности во времени и переносимости лабораторными животными. В результате выбраны 2 состава, приготовленные на фосфатном буфере: состав № 5, который содержит 10 % Kolliphor® ELP и дополнительно 10 % Kollidon 17PF, и состав № 8, в котором, помимо основного солюбилизатора, добавлены 10 % этанола и 16 % Kollidon 17PF. Оба состава имеют нейтральный рН, хранятся на протяжении 24 ч и удовлетворительно переносятся лабораторными животными.

Заключение. Выбранные модельные составы для солюбилизации субстанции OVF-009 на основе Kolliphor® ELP позволили обеспечить концентрацию действующего вещества в растворе, пригодную для проведения в дальнейшем биологических экспериментов на животных.

Введение. При разработке состава лекарственных препаратов актуальным направлением является применение методов компьютерного моделирования, в том числе методов молекулярной динамики (МД), которая значительно расширила возможности химии, обеспечив пространственное и временно́е разрешение, недоступное в экспериментах.
Цель исследования – моделирование высвобождения винпоцетина из альгината натрия с оболочкой из хитозана в среды растворения методом МД для определения характеристик компьютерного моделирования, позволяющих получать микрокапсулы с заданными биофармацевтическими свойствами.
Материалы и методы. Для моделирования высвобождения винпоцетина из альгината натрия с оболочкой из хитозана использован метод МД в силовом поле GROMOS 54a7 с использованием программы Gromacs 2019. С помощью программы HyperChem 8.0.1 построены молекулы компонентов моделируемых систем. Параметризация моделей производилась посредством интернет-сервиса Automated Topology Builder (http://atb.uq.edu.au/).
Результаты. По результатам моделирования МД рассчитаны энергии ван-дер-ваальсова взаимодействия винпоцетина с альгинатом натрия (альгиновой кислотой), хитозаном (хитозаном-катионом) и растворителем в пересчете на 1 молекулу винпоцетина. Рассчитывались также доли молекул винпоцетина, не связанных с полимером. Определено, что средние значения энергии ван-дер-ваальсова взаимодействия между винпоцетином и растворителем в кислой среде меньше, чем в нейтральной среде. В кислой среде, в отличие от нейтральной, наблюдается незначительное высвобождение винпоцетина.
Заключение. В ходе проведенного эксперимента установлено, что при pH 2,0 наблюдается растворение хитозана в водной среде и незначительное высвобождение винпоцетина из альгиновой кислоты в водный раствор хитозана (средняя доля молекул винпоцетина, не связанных с альгинатом натрия (альгиновой кислотой) и хитозаном, составляет 2,16 ± 2,33 %), высвобождение винпоцетина в воду при pH 6,8 не наблюдается.