Резюме РСК - это субпопуляция трансформированных клеток, которая является возможной причиной устойчивости злокачественных новообразований к терапии, а также рецидивирования и метастазирования опухолей. По этой причине РСК представляются перспективной мишенью для разработки новых подходов к противоопухолевой терапии. Выявлен ряд механизмов, позволяющих трансформированным клеткам приобретать фенотип стволовых, что значительно осложняет лечение злокачественных новообразований. Такими механизмами является вариант эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) и утрата е-кадгерина, приводящие к образованию в карциномах клеток, обладающих свойствами РСК. Целью данного обзора является рассмотрение возможных механизмов образования РСК в карциномах человека.

Экзосомы - это мембранные везикулы размером 80-130 нм, секретируемые практически клетками всех типов. Основной физиологической функцией экзосом считается перенос веществ и информации от клетки к клетке. Биохимический состав экзосом сохраняет черты сходства с клеткой-продуцентом и отражает этапы их эндосомального биогенеза, кроме того, в состав экзосом входят различные сигнальные и регуляторные молекулы, компоненты межклеточного матрикса и ферменты. Неопластическая трансформация сопровождается активацией секреции экзосом, причем опухолевые экзосомы играют значимую роль в развитии заболевания. Среди наиболее значимых эффектов экзосом отмечается подавление противоопухолевого иммунитета, стимуляция инвазивного роста и метастазирования, развитие устойчивости к действию цитостатических препаратов. Опухолевые экзосомы могут быть обнаружены во многих биологических жидкостях, включая кровь. Экзосомы биохимически стабильны, их состав определяет возможность проведения комплексного анализа. За последние несколько лет большим числом исследований доказана перспективность разработки методов диагностики онкологических заболеваний на основе анализа циркулирующих экзосом, хотя многие существенные и методологические вопросы остаются пока открытыми. В представленном обзоре коротко суммированы современные представления о биологии экзосом и обсуждены первостепенные методологические аспекты работы с экзосомами. Основное внимание уделено изложению и анализу результатов исследований с целью создание новых методов диагностики и мониторинга онкологических заболеваний на основе анализа экзосом и экзосо- мальных компонентов.

Вопрос о локализации белка PRAME в опухолевой клетке до сих пор не разрешён. Мы создали два антитела, специфично распознающие эпитопы PRAME, и с их помощью проверили локализацию данного белка в клетках линий К562 и mel Ког, изначально имеющих высокий уровень экспрессии гена PRAME, в клетках линий B16F10 и WI-38, трансфицированных данным геном, и исходных линий, а также в клетках, выделенных из костного мозга больных острыми лейкозами. Мы показали, что в клетках с высоким уровнем экспрессии PRAME наблюдается локализация белка как в ядре, так в цитоплазме и на клеточной мембране. При более низком уровне экспрессии данного гена локализация белка чаще наблюдалась в цитоплазме и на клеточной мембране. Более того, разработанные антитела при инкубации с клетками, экспрессирующими PRAME, продемонстрировали цитостатический эффект.

Многопараметрические суспензионные системы последнего поколения способны обеспечить высокоточный и одновременный количественный анализ специфических маркеров различных заболеваний в клинических пробах биологических жидкостей организма человека. Разработанные нами суспензионные микрочипы на основе микросфер, кодированных флуоресцентными НК, имеют преимущества по сравнению с существующими аналогами с точки зрения улучшенных многопараметрических возможностей, оптических свойств, простоты и дешевизны исполнения анализа. Мы адаптировали такую суспензионную систему для одновременного количественного определения двух форм ПСА в сыворотке крови человека в формате многопараметрического анализа с помощью классической проточной цитометрии. В настоящем исследовании оценены основные аналитические характеристики, такие как аналитическая (предельная) чувствительность, воспроизводимость, достоверность и точность анализа, линейные диапазоны определяемых концентраций онкомаркеров и потенциал разработанной системы по сравнению со стандартным иммуноферментным методом ELISA. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что разработанная диагностическая система позволяет с высокой точностью, аккуратностью и достоверностью одновременно определять количественное содержание двух форм ПСА в образцах сыворотки крови пациентов.

МЛУ является основным препятствием эффективности химиотерапии. В опухолевых клетках МЛУ может развиваться в ответ на действие даже одного цитостатического агента. Целью настоящей работы была характеристика МЛУ в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Экспрессию гликопротеина pgpl70 определяли в реакции иммунофлуоресценции, мРНК генов МЛУ определяли методом ОТ-ПЦР, выброс родамина 123 оценивали на проточном цито ф лу о р и метре, цитотоксическую активность определяли в МТТ-тесте. Определение чувствительности клеток к цитотоксическому действию аранозы показало, что клетки меланомы человека mel Ког чувствительны к действию препарата, а клетки mel Ibr и mel MtpX-устойчивы. В реакции иммунофлуоресценции было обнаружено, что от 35 до 50 % клеток линии mel Ibr экспрессировали pgpl70. Клетки mel Ког в. mel MtpX не экспрессировали Р-гликопротеин. В ПЦР определяли мРНК генов, ответственных за множественную лекарственную устойчивость - MDR1, BCRP, МЕРІ и LRP (МѴР). Во всех образцах линий клеток мРНК генов BCRP и МЕРІ экспрессируются слабо, а экспрессию мРНК гена LRP (МѴР) не удалось увидеть. мРНК гена YB1 экспрессируется хорошо, что характерно для опухолевых клеток, мРНК этого гена обнаружили в клетках mel MtpX и субклонах линии mel Ibr. Клетки линии mel Ког не содержат мРНК гена MDR1. Исследование выброса родамина 123 (Rhl23) из клеток показало, что контрольные клетки mel Ког накапливали Rhl23 и не выбрасывали его. Клетки линии mel Ibr накапливали Rhl23 и половину выбрасывали. Клетки линии mel MtpX накапливали мало родамина 123 и почти весь выбрасывали. Таким образом, исследование показало, что чувствительные к аранозе клетки линии mel Ког не экспрессируют pgpl70, не содержат мРНК генов МЛУ и не выбрасывают Rhl23. Резистентные к цитотоксическому действию аранозы клетки mel Ibr экспрессируют pgpl70, содержат мРНК гена MDR1, выбрасывают Rhl23. Однако устойчивые к аранозе клетки линии mel MtpX не экспрессируют pgpl70, но содержат мРНК гена MDR1 и активно выбрасывают Rhl23.

Исследована противоопухолевая активность и проведено доклиническое токсикологическое изучение фармацевтической композиции ЛХТА-1975, содержащей в качестве основного действующего компонента хлорид трис (1-пентил-ІН-индол-3-ил) метилия. Достоверный ростингибирующий эффект показан на мышах с лимфолейкозом Р-388, аденокарциномой молочной железы АК-755 и меланомой В-16. По данным токсикологических исследований препарат имеет значительный интервал между лечебными и токсическими дозами, что потенциально делает его интересным для дальнейшего изучения. При применении в дозах, в 5-10 раз превышающих терапевтические, композиция не вызывала токсических изменений в органах и тканях.

На неинбредных крысах, самках и самцах, проведено токсикологическое изучение L-аспарагиназы Was 79, полученной путем модификации природного фермента Wolinella succinogenes в ФГУП «ГосНИИгенетика». L- аспарагиназу вводили внутрибрюшинно в 1 и 10 терапевтических дозах (1200 и 12000 МЕ/кг) ежедневно в течение 15 суток. В ходе исследования определяли массу тела животных, проводили клинический и биохимический анализы крови, анализ мочи, снимали ЭКГ. На 1 и 15 сутки после окончания ку рса по пять животных из каждой группы подвергали эвтаназии. При вскрытии макроскопически оценивали состояние внутренних органов, определяли массовые коэффициенты сердца, печени, почек, селезенки и тимуса, проводили патоморфологическое исследование внутренних органов. Проведенное исследование показало, что применение L-аспарагиназы не оказывает влияния на массу тела животных, показатели клинического и биохимического анализов крови, анализа мочи. Гемато-, нефро-, панкреа-, и гастроинтестинальная токсичность проявляются только при патоморфологическом исследовании. Гепатотоксичность, выявленная при микроскопическом изучении, была подтверждена результатами биохимического анализа сыворотки крови, который показал значительное увеличение уровней АЛТ и щелочной фосфатазы в обеих группах животных, получавших L-аспарагиназу. Обнаруженные изменения были обратимы и зависели от дозы препарата.

Исследование посвящено изучению «острой» токсичности лекарственного средства на основе производного индолокарбазола - ЛХС-1208 - на мышах и крысах, самках и самцах, при двух путях введения (внутрибрюшинно и внутривенно). Для экспериментов использовались лабораторные животные - беспородные белые крысы и мыши-гибриды первого поколения (C57B1/6J^XDBA2)F1 (B6D2F1). В результате исследований были получены расчетные токсические дозы лекарственного средства на основе производного индолокарбозола при внутрибрюшинном применении мышам, самкам и самцам.

В работе представлены результаты изучения «острой» токсичности и промежуточные результаты изучения «субхронической» токсичности нового противоопухолевого препарата из класса нитрозомочевин - Ормустинана мелких лабораторных животных. Для экспериментов использовались лабораторные животные - мыши-гибриды (C57Bl/6J×DBA/2)F1. самцы и самки, неинбредные крысы, самцы и самки. В результате исследований были получены расчетные токсические дозы Ормустина при внутривенном применении мышам и крысам; дана предварительная оценка влияния многократного внутривенного применения Ормустина на органы и системы организма крыс.

В настоящее время аналоги гормона соматостатина вызывают все больший интерес в связи с их активностью в отношении гормонозависимых опухолей, что обусловливает необходимость разработки отечественных препаратов, относящихся к данной группе. В лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Мин здрава России синтезирован новый отечественный пентапептид, АГГС. В ходе предварительных исследований данной субстанции продемонстрирована достаточно высокая противоопухолевая активность АГГС на перевиваемых солидных опухолях мышей. В связи с нерастворимостью данного вещества в воде в качестве альтернативной ЛФ предложена липосомальная, позволяющая повысить биодоступность данного препарата за счет возможности его внутривенного введения, увеличить терапевтическую эффективность и снизить побочные эффекты, путем повышения избирательности действия на опухолевые клетки. В ходе экспериментов, посвященных разработке липосомальной лекарственной формы АГГС, создана предварительная модель, содержащая в качестве основных компонентов липосомального бислоя яичный лецитин и полиэтиленгликоль-2000-дистеароилфосфатидил-этаноламин в молярных соотношениях 72/1 и в качестве крио протектора сахарозу. При отработке технологических параметров процесса получения ЛФ выяснено, что для обеспечения приемлемого размера получаемых фосфолипидных везикул необходимо порядка 7 циклов экструзии. Отсутствие стабильности липосомальной дисперсии выбранного состава в процессе хранения привело к решению этой проблемы с помощью лиофилизации, которая сохраняла физико-химические показатели ЛФ на первоначальном уровне. Доказана эффективность данной модельной ЛФ на перевиваемой опухоли мышей - аденокарциноме молочной железы Са-755, которая составила более 60 % ТРО при дозе 5 мг/кг и более 80 % ТРО при дозе 20 мг/кг. Полученные данные биологических экспериментов указывают на перспективность дальнейшего исследования и усовершенствования липосомальной ЛФ с целью получения высокоэффективного отечественного противоопухолевого препарата из группы аналогов соматостатина.

Противоопухолевая терапия саркомы М-1 крыс проведена с использованием комбинированного метода лечения (фотодинамическая терапия и лучевая терапия) при различной последовательности ее проведения, при разных временных интервалах и параметрах лазерного облучения. Доза фотосенсибилизатора амидоаминхло- рина и доза у-излучения были одинаковыми во всех проведенных исследованиях. Цель исследования - изучить воздействие всех составляющих комбинированной терапии и определить оптимальные условия ее проведения для достижения значимого противоопухолевого эффекта по сравнению с монотерапией каждого из них. В результате исследований выявлено усиление ингибирующего эффекта при комбинированной терапии и найдены оптимальные параметры ее проведения.

Синтезированы нейтральный фотосенсибилизатор аминобутиламид хлорина eg с терминальной аминогруппой (1) и полученный на его основе катионный фотосенсибилизатор с терминальной триметиламмониевой группой (2). Изучены спектральные, фотофизические и фотобиологические характеристики соединений 1 и 2, а также дана оценка влиянию заряда в молекуле 2 на фотоиндуцированную противоопухолевую активность в экспериментах in vitro. Определены относительные коэффициенты внутриклеточного накопленіи соединений 1 и 2 в клетках аденокарциномы легкого человека А549 и глиобластомы человека U251. Показано, что значеніи коэффициентов внутриклеточного накопления нейтрального хлорина 1 в обоих типах клеток в 5 раз выше, чем катионного хлорина 2, и, как следствие, он в 15 раз превосходит последний по фотоиндуцированной цитотоксичности.

Нами разработан оригинальный препарат Лимфотест на основе соединения из группы дисульфопроиз- водных диаминотрифенилметановых красителей, отличающийся (от Лимфозурина) положением сульфогрупп в бензольном кольце - Ы-|4-(4-диэтиламинофснид)(2.4-дисульфофенилмстилсн)-2,5-циклогсксадиснилидсн-1 |-N- этилэтаминий гидроксид внутренняя соль, натриевая соль. Предлагаемое соединение спектрально практически не отличается от Лимфазурина, однако гораздо более доступно и обладает высокой лимфотропностью. Препарат Лимфотест в виде 1 %-ного водного раствора характеризуется высокой диагностической эффективностью при использовании метода прямой цветной лимфографии, низкой токсичностью (введенные дозы превышали предполагаемую максимальную дозу для человека в 50-1000 раз) и не оказывает местнораздражающего действия при подкожном применении.

Статья посвящена оценке эффективности использования гидрогелевого материала «Колегель-5-фтур» на основе альгината натрия с 5-фторурацилом, в том числе - имеющего форму диска, в процессе химиолучевой терапии у больных раком прямой кишки, раком молочной железы и раком дна полости рта. В группу включены 38 пациентов: 19 с диагнозом РПК, 10 - с диагнозом РМЖ, 9-е диагнозом «рак дна полости рта». В исследовании использовали материал гидрогелевый «Колегель-5-фтур» при проведении химиолучевой терапии по поводу гистологически подтвержденного диагноза злокачественной опухоли. Эффективность комбинированного лечения была доказана по следующим критериям: локальный контроль опухоли, анализ токсичности и непосредственного эффекта. Таким образом, использование материалов гидрогелевых «Колегель-5-фтур» у выбранной группы пациентов при агрессивной химиолучевой терапии обеспечило повышение эффективности осуществляемой терапии.