Разработка новых лекарственных средств является одним из приоритетных направлений трансляционной медицины. Существенная роль отводится биомаркерам (БМ), оценивающим безопасность и эффективность новых препаратов. Правильный выбор БМ позволяет сократить время и затраты, необходимые для разработки препаратов и передачи их в клинику. Обзор посвящен анализу современной научной литературы относительно роли ранее известных и вновь открытых БМ в трансляционных исследованиях. Трансляционные БМ (ТБМ) устанавливаются во время доклинических испытаний и применяются на всех этапах исследования. ТБМ должны обладать высокой чувствительностью и специфичностью, легко измеряться в реальном времени в легкодоступных биологических средах, одинаково оценивать процесс у разных видов животных (в том числе у человека), позволять сравнивать результаты клинических исследований с доклиническими. Основная роль ТБМ токсичности – предсказывать, определять и отслеживать токсичность препаратов на всех этапах их изучения. Создан международный консорциум (Predictive Safety Testing Consortium, PSTC), основной задачей которого является квалификация новых ТБМ токсичности и поиск новых, более совершенных, чем существующие, методов тестирования маркеров. В рамках PSTC сформировано 6 рабочих групп, каждая из которых координирует исследования по изучению и отбору ТБМ токсичности, вызванной введением препаратов, в печени, почках, сердце и сосудах, скелетной мускулатуре, семенниках. Первыми квалифицированными консорциумом маркерами были 7 содержащихся в моче маркеров для доклинических исследований на крысах с целью установления ранних поражений в почках, индуцированных действием препаратов. Лишь небольшое число БМ, используемых при изучении новых лекарств, смогут стать трансляционными.

В настоящее время маммография – основной скрининговый метод диагностики рака молочной железы (РМЖ); но процесс канцерогенеза начинается задолго до появления визуализируемого новообразования. Поэтому для успешной ранней диагностики РМЖ у населения необходим системный подход, который будет затрагивать все этапы развития опухоли. В статье на примере РМЖ – социально значимого заболевания – обсуждаются перспективы интеграции недавних научных достижений онкогенетики и протеомики со стандартными методами. Рассмотрены возможности применения генетических исследований, сывороточных онкомаркеров и лучевых методов при ранней диагностике РМЖ, а также представлены потенциальные варианты, которые могут быть использованы при ведении таких пациентов.

В структуре онкологической заболеваемости рак молочной железы (РМЖ) занимает 1-е место, и частота его неуклонно растет. Ежегодно в мире диагностируется около 1,67 млн первично выявленных случаев РМЖ и более 500 000 женщин умирает от этого заболевания. Трижды негативный РМЖ (ТНРМЖ) составляет около 15–20 % всех случаев РМЖ и встречается чаще у женщин фертильного возраста. ТНРМЖ характеризуется отсутствием экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона и HER-2/neu, что существенно затрудняет лечение. Для ТНРМЖ типичны агрессивное течение, высокий риск рецидива в течение первых 3 лет после лечения, а также быстрое метастазирование и снижение продолжительности жизни. В данной статье представлен обзор литературы о молекулярно-биологических характеристиках ТНРМЖ, а также рассмотрены основные подходы к таргетной терапии каждого подтипа.

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) до настоящего времени привлекают к себе внимание биологов и врачей в первую очередь в связи с тем, что ряд представителей этой группы вызывают рак шейки матки у женщин. Вместе с тем очевидно, что в циркуляции этих вирусов в популяции участвуют как женщины, так и мужчины. Накапливаются данные о том, что имеется ряд особенностей в распространении ВПЧ среди мужчин по сравнению с женщинами, а также о том, что онкогенные ВПЧ вызывают рак в некоторых органах и у мужчин. Настоящая работа представляет собой попытку обобщения данных литературы об особенностях распространения ВПЧ у мужчин. Уяснение этих различий важно для разработки эффективных мер профилактики ВПЧ-ассоциированных новообразований с учетом гендерных особенностей.

Появление в клинической практике ингибиторов иммунных контрольных точек стало революцией в лечении метастатической меланомы кожи. Однако блокада PD-1 позволяет добиться объективного ответа лишь у 30–40 % пациентов. К настоящему времени известно множество механизмов первичной резистентности меланомы к иммунотерапии, связанных с особенностями как опухоли, так и опухолевого микроокружения. Как правило, ответ на анти-PD-1 терапию является длительным, но вторичная резистентность формируется у 25 % пациентов, имевших объективный ответ на данный вид лечения. В этом обзоре описаны основные механизмы резистентности метастатической меланомы кожи к анти-PD-1 терапии, а также возможные пути их преодоления.

Распространенность рака шейки матки (РШМ) за последние годы значительно возросла. Основной причиной смерти больных РШМ IIB–IV стадий являются рецидивы и метастазы опухоли, чаще всего с поражением тазовых и поясничных лимфатических узлов. Ультразвуковая диагностика занимает одно из ведущих мест в современной онкогинекологии благодаря таким достоинствам, как неинвазивность, безвредность метода, возможность многократных исследований, доступность и относительно невысокая цена. В настоящее время в ультразвуковой диагностике появляется все больше новых, дополнительных методик, направленных на повышение качества и информативности изображения. Одной из таких методик является эластография, позволяющая оценить эластичность тканей путем оценки жесткости образования в режиме реального времени неинвазивным способом. Несмотря на то, что отдельные исследования указывают на достижения современных технологий, отсутствуют сведения, при каких ситуациях применение их наиболее информативно или, наоборот, нецелесообразно изза имеющихся пределов метода. Иными словами, существует потребность формирования алгоритма использования ультразвуковых методик для достижения оптимального результата при оценке эффективности проводимой терапии РШМ.

Существуют многочисленные подтверждения того, что диссеминированные опухолевые клетки (ДОК) в костном мозге пациентов с первичным раком молочной железы (РМЖ), в том числе и на ранних стадиях, являются предшественниками последующих отдаленных метастазов. Поэтому ДОК могут служить дополнительным маркером для оценки прогноза и понимания канцерогенеза, но существующие данные противоречивы. Цель исследования – определить частоту выявления ДОК в костном мозге у пациентов с люминальным РМЖ, а также их связь с некоторыми клиническими и иммунофенотипическими параметрами. Материалы и методы. Биоптаты костного мозга 65 пациентов с первичным люминальным РМЖ изучены на предмет наличия ДОК посредством акустического фокусирующего цитометра Attune. Впервые в России была повышена чувствительность метода обнаружения ДОК в костном мозге до уровня 1 × 10–7 миелокариоцитов. Результаты. В костном мозге ДОК обнаружены у 40 % пациентов, вместе с тем полученный результат не коррелировал ни со стадией опухолевого процесса, ни со степенью злокачественности. Уровень CD8+-лимфоцитов у пациентов с ДОК в костном мозге был достоверно ниже и составил 39,2 % против 48,1 % у пациентов, не имеющих ДОК (р = 0,011). Содержание миелокариоцитов при ДОК-положительном статусе было в 1,6 раза ниже, чем при отсутствии ДОК (р = 0,007). Другие параметры миелограммы не имели статистически значимых различий. Более того, не было обнаружено существенных корреляций между наличием ДОК в костном мозге и иммунофенотипом опухоли молочной железы (HLA-I: p = 0,74; HLA-DR: p = 0,93; CD71: p = 0,46). Заключение. Наличие ДОК в костном мозге в большей степени связано с показателями миелограммы и субпопуляцией лимфоцитов костного мозга, чем с клиническими характеристиками опухоли.

В настоящее время ведется постоянный поиск новых эффективных методов защиты от ишемического повреждения, происходящего в момент создания тепловой ишемии при органосохраняющих операциях на почке и несущего в себе риск свести на нет функциональные результаты лечения. Цель исследования – улучшение функциональных результатов хирургического лечения, сокращение числа койко-дней. Материалы и методы. Нами проведено клиническое исследование перенесших органосохраняющие операции на почке по поводу почечно-клеточного рака по элективным показаниям. В исследование включены 69 пациентов. Время тепловой ишемии 14,2 ± 2,4 мин. В 1-й группе (n = 34) проводилась стандартная послеоперационная терапия, во 2-й группе (n = 35) в послеоперационном периоде проводили комплексную терапию: ежедневные сеансы гипербарической оксигенации (всего 5 сеансов) совместно с пероральным приемом α-токоферола ацетата в течение месяца. Проведены исследования изменений показателей общего анализа крови (степени лейкоцитоза, скорости оседания эритроцитов, лимфоцитоза, лейкоцитарного индекса интоксикации), скорости клубочковой фильтрации, состояния иммунитета, периферического кровообращения, функции почек, качества жизни. Результаты. Данная схема послеоперационной реабилитации у пациентов с почечно-клеточным раком способствует активации противовоспалительного и иммунного ответа на оперативное лечение, более быстрому и полному восстановлению кровоснабжения и функции оперированного органа. Выводы. Комплексное послеоперационное влияние гипербарической оксигенации и α-токоферола позволяет снизить частоту послеоперационных осложнений и сократить сроки госпитализации.

Одним из химиопрепаратов, применяемых для лечения меланомы, является араноза, препарат из класса производных нитрозомочевины – метилирующий ДНК агент. Действие аранозы связано с повреждением ДНК, после которого включаются механизмы апоптоза. Важную роль в этом процессе должен осуществлять белок р53, а различные нарушения данного белка могут приводить к лекарственной устойчивости. Цель исследования – изучить мутационный статус белка р53 в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека и оценить его связь с резистентностью клеточных линий к аранозе. Материалы и методы. Исследование проводили на 14 клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека. Методом МТТ-теста была определена ИК50 аранозы для клеточных линий. С помощью флуоресцентной гибридизации in situ оценили состояние короткого плеча хромосомы 17, на котором находится ген р53. С помощью секвенирования по Сэнгеру изучили наличие точечных мутаций в ДНК-связывающем домене гена р53. Результаты. Клеточные линии метастатической меланомы кожи имели разную чувствительность к аранозе. Практически все клеточные линии были неоднородны по состоянию хромосомы 17. В 2 линиях были обнаружены точечные мутации в гене р53. При этом часть устойчивых клеточных линий почти не имели мутационных нарушений р53, а другая часть устойчивых линий, наоборот, несла множество нарушений гена р53. Выводы. Для части клеточных линий метастатической меланомы кожи можно установить корреляцию резистентности с мутациями гена р53. Однако для других клеточных линий метастатической меланомы кожи резистентность, скорее всего, обусловлена и иными механизмами.

Получение флуоресцентных зондов на основе моноклональных антител (МКА) к поверхностным антигенам лейкоцитов человека является актуальной задачей, решение которой даст возможность проводить научные и клинические исследования в области онкологии, гематологии, иммунологии, эпидемиологии. Цель исследования – создание флуоресцентных зондов на основе МКА и флуоресцентного красителя Alexa-488 для анализа клеточных популяций и субпопуляций лейкоцитов человека методом проточной цитометрии. Материалы и методы. В работе использовали МКА к антигену В-лимфоцитов (клон ИКО-180) и флуоресцентный краситель Alexa-488 в форме активного моносукцинимидного эфира. МКА выделяли из асцитной жидкости мышей с привитой внутрибрюшинно гибридомой путем комбинированной очистки иммуноглобулиновой фракции каприловой кислотой и высаливания сульфатом аммония. Для очистки полученных конъюгатов (иммунофлуоресцентных зондов, ИФЗ) применяли гель-фильтрацию на колонке PD-10, концентрацию и плотность мечения ИФЗ определяли спектрофотометрически. Оценку биологической активности полученных ИФЗ проводили с использованием клеток периферической крови доноров в диапазоне концентраций МКА 0,5–100 мкг/мл. Определение рабочего титра ИФЗ проводили по методу титрования антител, предложенному C.C. Stewart. Результаты. Экспериментально установлено оптимальное время инкубирования МКА с флуорофором. Получена панель ИФЗ с различной плотностью мечения Alexa-488. Для этого варьировали молярное соотношение МКА и флуорофора в среде реакции конъюгирования от 1:2 до 1:100. Оптимальная плотность мечения ИФЗ находится в диапазоне 5–13,5 М:М, концентрация антител – в диапазоне 5–25 мкг/мл. Для ИФЗ из МКА ИКО-180 с Alexa-488 такие высокие значения плотности мечения не приводят к снижению эффективности флуоресценции и антигенсвязывающей способности. Сравнительная характеристика специфической активности ИФЗ на основе МКА ИКО-180 и коммерческих ИФЗ (BD Biosciences) показала сопоставимые результаты. Заключение. Оптимальными условиями для мечения МКА ИКО-180 красителем являются: карбонатный буфер с рН 8,3, концентрация антител в реакционной смеси 1 мг/мл, количество активного красителя 10–100 ммоль на 1 ммоль белка,время инкубирования 90 мин при температуре 18–25 °С.

В ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России в соответствии с российской федеральной программой по импортозамещению зарубежных лекарственных препаратов качественными российскими препаратами был воспроизведен винкристин-РОНЦ (ВК-РОНЦ), который проходил доклинические фармакологические и токсикологические испытания в сравнении с винкристином фирмы Teva производства Израиля (ВК-Teva). Цель исследования – сравнительная патоморфологическая оценка влияния ВК-РОНЦ и ВК-Teva на внутренние органы крыс. Материалы и методы. Использовано 50 неинбредных беспородных крыс-самцов, по 10 крыс в группе. Крысам вводили ВК-РОНЦ и ВК-Teva внутривенно ежедневно (в течение 3 дней) в эквитоксических суммарных дозах, соответствующих максимально переносимым дозам (МПД) и 1/2 МПД. Контрольным крысам в том же режиме внутривенно вводили 0,9 % раствор хлористого натрия. Крыс выводили из опыта на 3-и и 30-е сутки после окончания введений препаратов. Проводили макроскопическое и гистологическое исследование внутренних органов по общепринятым методикам, включавшим фиксацию материала в 10 % формалине и окраску срезов гематоксилином и эозином. Микропрепараты внутренних органов анализировали и фотографировали на световом микроскопе при увеличениях 100, 400, 1000. Результаты. ВК-РОНЦ и ВК-Teva в суммарных дозах 0,5 и 0,25 мг/кг на 3-и сутки после окончания введений вызывают во внутренних органах крыс сходные несильно выраженные морфологические изменения: гипоплазию в костном мозге и селезенке, деструктивные изменения в семенниках, очаговые дистрофические изменения в почках и печени отдельных крыс. На 30-е сутки после окончания применения обоих препаратов у некоторых крыс независимо от дозы имели место сходные остаточные морфологические изменения в костном мозге, семенниках, почках и печени. Заключение. На основании полученных результатов макроскопического и гистологического исследований сделан вывод о сходстве влияния ВК-РОНЦ и ВК-Teva на внутренние органы крыс.

Применение липосом в качестве систем доставки лекарственных средств в организм человека сегодня является признанным подходом к повышению эффективности лечения. По сравнению с другими наноразмерными носителями липосомы отличаются высокой биосовместимостью. Однако в литературных источниках имеется ряд данных об иммуногенности некоторых липосомальных препаратов. Проявления реакции гиперчувствительности средней и тяжелой степени отмечены у части пациентов при внутривенном введении липосом Doxil®, Ambisome®, DaunoХome®. Технология производства липосом – достаточно трудоемкий процесс, поэтому получение липосомальных лекарственных форм (ЛЛФ) в промышленных масштабах для проведения доклинических и клинических исследований проблематично для исследователей и производителей всего мира. В связи с этим актуальным представляется проведение исследований специфической токсичности липосомальных препаратов и масштабирования технологии получения липосом. Цель исследования – оценка качества опытных образцов ЛЛФ на основе тетра-3-фенилтиофталоцианина гидроксиалюминия, полученных по масштабированной технологии, в сравнении с образцами, произведенными в лабораторных условиях, а также изучение их мутагенных и иммунотоксических свойств. Объект исследования – тетра-3-фенилтиофталоцианин гидроксиалюминия липосомальный, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 1,5 мг, во флаконах вместимостью 20 мл. Материалы и методы. В работе использовались метод Бенгема, экструзия, стерилизующая фильтрация, лиофилизация; тест на нарушение целостности межклеточных контактов (на промоторную активность), бактериальный тест Эймса, цитогенетическое исследование по учету хромосомных аберраций, тест на способность вызывать повреждение ДНК (тест ДНК-комет), метод Ерне; реакция гиперчувствительности замедленного типа, определение массы и клеточности центральных и периферических органов иммунитета, оценка фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов. Результаты. По результатам проведенных исследований масштабирована технология получения ЛЛФ, позволяющая получать до 400 флаконов ЛЛФ за один производственный цикл. Установлено, что ЛЛФ в дозах 6 и 24 мг/кг не увеличивает количество хромосомных аномалий у мышей и не вызывает повреждений ДНК, в дозах 1,1–22,0 мкг/чашка не проявляет мутагенной активности в бактериальном тесте Эймса, в диапазоне концентраций 0,062–3,1 мкг в тесте на промоторную активность не разобщает межклеточные контакты. Определено, что ЛЛФ в дозах 6 и 12 мг/кг при 1-кратном внутривенном введении не оказывает влияния на гуморальный и клеточный иммунные ответы, не изменяет массу и клеточность центральных и периферических органов иммунной системы. ЛЛФ через 24 ч после введения в дозах 6 и 12 мг/кг дозозависимо снижает фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов, которая восстанавливается через 7 сут. Заключение. Масштабирована технология получения ЛЛФ. В исследуемых дозах установлено отсутствие у ЛЛФ способности промотировать процесс канцерогенеза и влиять на гуморальный и клеточный иммунные ответы.

Рецептор Her2 является важной мишенью противоопухолевой терапии при лечении рака молочной железы. В настоящее время в клинической практике применяют препарат на основе моноклональных антител анти-Her2 – трастузумаб. Трастузумаб производится в культуре животных клеток и стоит достаточно дорого. Разработана технология продукции рекомбинантных антител в растительном продуценте Nicotiana benthamiana с высоким выходом очищенного белка. Цель исследования – сравнение аффинных свойств рекомбинантных антител, полученных классическим способом в культуре клеток и полученных в растительной биомассе. Материалы и методы. Рекомбинантные фитоантитела выделяли методом аффинной хроматографии из биомассы растений N. benthamiana, агроинфильтрованных векторными конструкциями. Сравнение аффинных свойств проводили методами иммуноцитохимической окраски клеток, конкурентного связывания нативным эпитопом с анализом методом проточной цитофлуориметрии. Результаты и заключение. В данной работе нами установлено, что антитела, экспрессированные в N. benthamiana, не уступают аналогам, полученным из клеток млекопитающих, в связывании антигена Her2 на поверхности мембран клеток SK-BR-3. В настоящей работе впервые показано, что полученные фитоантитела анти-Her2 не отличаются от трастузумаба по специфичному связыванию с антигеном Her2, а также с IV субдоменом рецептора Her2.